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离体诱导的离体水稻抗褐飞虱生物型的研究 黄褐色门内虫（stue560l）是水稻生产中的一起害虫，严重影响了水稻的高产和稳产。长期以来人们主要采用化学防治和抗虫品种等措施防治褐飞虱,但大量使用农药往往带来农药残留、环境污染等问题,甚至导致褐飞虱产生抗药性和猖獗为害[1~3];利用抗虫品种则会增加褐飞虱的取食选择压力而产生新的生物型导致品种抗性丧失。诱导抗虫性为解决褐飞虱危害提供了新途径。 茉莉酸类物质能够诱导植物防御基因的表达,明显提高植物直接防御物质和间接防御物质的含量,从而提高植物对害虫的直接和间接防御作用[6~8]。本文研究茉莉酸甲酯诱导水稻后对稻株总酚含量变化的影响,并分析诱导水稻后总酚含量变化与其抗褐飞虱的关系。 1 材料和方法 1.1 水o饲养的生物型 供试虫源:褐飞虱为室内用水稻品种Mudgo饲养的生物型Ⅱ。 供试水稻品种:TN1、IR26、IR36。其中,IR36抗褐飞虱生物型Ⅱ,TN1、IR26感褐飞虱生物型Ⅱ。 1.2 测试方法 1.2.1 茉酸甲酯吸光度测定 茉莉酸甲酯诱导浓度设为2水平:0.25和0.50 m M。将供试水稻品种催芽后播入塑料杯(Ф8 cm×10cm),每杯7苗为一个重复,每品种设12个重复。当水稻为3叶期时喷施茉莉酸甲酯,以喷施1%乙醇作对照,然后取样并测定稻株总酚含量。 诱导方法:用无水乙醇将茉莉酸甲酯溶解,再用去离子水稀释至所需浓度。将0.25、0.50 m M浓度的茉莉酸甲酯溶液及空白对照装入小型喷雾器中喷施水稻苗至茎叶挂满水珠为宜。 取样方法:诱导2 d后,每品种3个重复,每重复选取3株键壮植株,剪取第2片叶,称取鲜样106.7±0.2 mg,剪碎、混匀、缩分后,用5 m L甲醇浸泡12 h,取其上层清液,挥发干溶剂。加入5 m L50%的甲醇水溶液,重新溶解,作为测试样品。 样品测定:吸取上述待测液1 m L于试管中,加水摇匀定容至2.75 m L,再加0.5 m L Folin-Ciocalteu试剂溶液,充分摇匀后在8 min内加入0.5 m L 20%Na2CO3溶液,摇匀,然后在室内放置反应2 h。转入比色皿,用分光光度计于720 nm处测定其吸光值。将测定的吸光值代入标准曲线方程,计算样品的总酚含量。 1.2.2 水稻诱导处理 本试验于2007年6月在广西农科院植保所实验室内进行。将供试品种播在瓷盘(32cm×46 cm×3 cm)内,每盘播3个水稻品种,每品种l行。按随机区组设计,每个诱导处理重复3次。当苗龄达到3叶期时喷施0.25、0.50 m M浓度的茉莉酸甲酯,以喷施1%的乙醇作为对照。喷药1h后按每苗接入褐飞虱生物型Ⅱ1~2龄若虫5头。当感虫对照TN1植株枯萎后7~10 d,参照国际使用统一标准进行逐株定级,最后计算各品种的平均受害级别。 1.2.3 水稻保水剂的诱导与诱导 将供试品种TN1、IR26、IR36播在瓷盘(32 cm×46 cm×3 cm)内,于三叶期喷施0.25、0.50 m M浓度的茉莉酸甲酯,以喷施1%乙醇作为对照。茉莉酸甲酯诱导处理1 h后,从盘中挖起水稻植株,用清水培养于玻璃试管(Ф25 cm×5 cm)中,每管2苗为1个重复,每品种设10个重复。然后,每管接入褐飞虱生物型Ⅱ初孵若虫10头,并在管口盖上纱布以防褐飞虱逃逸。试验期间,每两天更换新鲜的诱导后三叶期稻株,每天检查记录若虫发育情况、若虫羽化日期及羽化虫数,并取出羽化的成虫,直至所有若虫羽化完毕。最后,计算若虫的发育历期和存活率。 1.2.4 水稻的诱导诱导 将供试水稻品种催芽后播入塑料杯(Ф8 cm×10 cm),每杯1苗为1个重复,每品种设12个重复。用0.25、0.50 m M浓度的茉莉酸甲酯喷施3叶期水稻,以喷施1%乙醇作为对照。诱导处理1 h后,在稻株主茎第一或第二叶鞘的顶部套一只石蜡薄膜(parafilm)小袋(3 cm×3.4 cm),然后接入1头羽化1~2 d的褐飞虱生物型Ⅱ雌成虫。让其取食24 h,然后取下小袋,并在精密电子天平上称褐飞虱分泌的蜜露量,计算拒食率。 1.3 处理数据 所有数据采用Excel及DPS数据处理软件进行统计分析。 2 结果与分析 2.1 不同植物精神原素对稻株总酚含量的影响 茉莉酸甲酯诱导水稻后对稻株总酚含量的影响结果见表1。茉莉酸甲酯诱导TN1、IR26,0.25、0.50 m M诱导稻株的总酚含量均与对照差异显著;诱导IR36,0.25 m M茉莉酸甲酯诱导稻株的总酚含量最高,对照稻株总酚含量最低,且显著低于受0.25、0.50 m M茉莉酸甲酯诱导后稻株的总酚含量。2.2茉莉酸甲酯诱导水稻后对褐飞虱生物型Ⅱ抗性的影响 用0.25、0.50 m M浓度茉莉酸甲酯诱导TN1、IR26和IR36后,这3个品种受褐飞虱生物型Ⅱ为害的受