庄浪县马铃薯组培技术规程.pdfVIP

庄浪县马铃薯组培技术规程 1 范围 本文件规定了庄浪县组培室的要求，包括脱毒材料的选取、无菌苗的培养、茎尖脱毒与培养、 病毒和品种真实性鉴定及组培苗扩繁等技术操作规程。 本文件适用于庄浪县马铃薯脱毒和脱毒组培苗的扩繁。 2 规范性应用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引 用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修 改单）适用于本文件。 GB 18133 马铃薯种薯 GB/T29375-2012 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程 GB/T29378-2012 马铃薯种薯繁育技术规程 NY/T401-2000 脱毒马铃薯种薯 （苗）病毒检测技术规程 NY/T1963-2010 马铃薯品种鉴定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 脱毒 应用茎尖组织培养技术，脱去主要危害马铃薯的病毒和类病毒。 3.2 叶原基 在茎尖生长点的基部形成的突起。 3.3 茎尖 芽顶端部分 （0.1-1.0mm）其中包括分生组织 （0.05-0.1mm）及芽原基和正在生长发育的叶 原基。 3.4 脱毒核心苗 应用茎尖分生组织培养技术获得的，经检测确认不带马铃薯病毒和类病毒，不带任何细菌和 真菌，经试种观察具有原品种典型性状的脱毒苗。 4 组培室的要求 组培室建设时周围应无污染源，与大田生产隔离，选择向阳、干燥、通风、清洁的环境。组 培室应功能齐全具有独立的生产空间。 1 4.1 组培室设置 庄浪县马铃薯组培室周围采用密闭玻璃，通过特定的大门和通风橱与外界相连。组培室内设 有接种室、制备室、光照培养室、检测室、储藏室等功能区，各功能区布局应遵循方便消毒、减 少污染的原则。培养室采用人工光源和全自然光两种，采用全自然光时，培养室宜选用玻璃和阳 光板，培养室通过空调调节温度，缓冲间设有水池和消毒槽。 4.2 设施、设备及药品的要求 4.2.1 生产组培苗的设施、设备、药品见附件1 4.3 培养基的配方 （见表1） 4.4 卫生要求 4.4.1 基本要求 组培室各功能间应保持干净、整洁，每周用84消毒液清洁工作台面、窗台及地面。 4.4.2 接种室 定期用84消毒液对培养室内培养架和窗台擦拭、紫外灯消毒，每次灭菌40-60min，每周开 启1-2次。 4.4.3 培养室 应定期使用84消毒液擦拭培养架和窗台，每周开紫外灯1-2次，每次灭菌40-60min。 4.4.4 超净工作台 每次使用前，应提前30min打开缓冲间、培养室、超净工作台的紫外灯，用75%的酒精擦拭 工作台面。 4.4.5 接种工具 每台超净工作台应备三套接种工具轮流使用。接种前将使用的镊子、剪刀及茎尖剥离的解刨 刀、解刨针插入高温灭菌器中灭菌，冷却后备用。 4.4.6 接种操作人员 进入接种室前，鞋底喷施酒精消毒后，换上无菌鞋，用肥皂或洗手液洗净双手，换上无菌服， 戴好口罩、手套和一次性医用帽子，每转接完一盒基础苗后，用75%的酒精擦拭双手和台面，并 将镊子、剪刀插入灭菌器消毒至少14s。 4.4.7 污染瓶苗处理 组培苗培养期间，应经常观察组培苗的生长状态，发现污染应及时清除，将污染瓶苗深埋处 2 理。 5 茎尖脱毒 5.1 茎尖脱毒的原理 茎尖脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个 途径。感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎 顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点(约0.1～1.0mm 区域)则几乎不含或含病毒很少。在切 取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。 5.2 脱毒材料的选择 在马铃薯植株生长发育期内，选择具有品种典型性、生育健壮的单株，结合产量情况和田间 病毒检测结果，选择高产、无明显病毒性的单株。在所选植株中进行薯块复选，选用大薯率高、 无病斑、无虫蛀、无机械损伤、薯型、芽眼等性状符合植株特性的薯块，作为外植体