结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR法）.pdfVIP

结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR 法） 1 范围 本文件规定了结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒的术语和定义、要求、试验方法、标签和使用说 明书、包装、运输和贮存。 本文件适用于定性检测外周血血浆和粪便样本的结直肠癌相关基因甲基化状态,如Septin9、SDC2、 BCAT1、SFRP2、TFPI2、NDRG4和BMP3基因等。 本文件适用于荧光PCR法、PCR荧光探针法等方法的试剂盒，不适用于高通量测序法的试剂盒。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 29791.2 体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第2 部分：专业用体外诊断试剂 GB/T191-2008包装储运图示标志 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 DNA甲基化 DNA methylation 在DNA甲基化转移酶的催化作用下，将一个甲基基团添加在DNA 分子的碱基上。最常见的是将甲基 基团加在CpG二核苷酸胞嘧啶的第5位碳原子上，形成5-甲基胞嘧啶 （5mC）。 3.2 亚硫酸氢盐转化 Bisulfite conversion 用亚硫酸氢盐诱导DNA氧化脱氨，非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。 之后进行PCR，对产物进行检测，判断甲基化状态。 4 要求 4.1 外观 试剂盒应符合制造商规定的外观要求。试剂盒各组分应齐全、完整、无液体渗漏。 4.2 核酸提取功能 适用时，核酸提取功能应符合如下要求： 1 — a) 含有核酸提取组分的试剂盒，制造商应对核酸提取做适当要求，并对核酸提取功能进行验证， 如：充分考虑样本提取过程存在的干扰因素； b) 样本需要提取，但不含有核酸提取组分的试剂盒，由制造商说明或指定提取试剂盒，并提供验 证资料； c) 样本不单独体现提取步骤，直接进行亚硫酸氢盐转化的试剂盒，制造商应对整体实验环节的功 能性做适当要求，并提供验证资料。 4.3 转化功能 适用时，亚硫酸氢盐转化功能应符合如下要求： a) 含有亚硫酸氢盐转化组分的试剂盒，制造商应对亚硫酸氢盐转化功能做适当要求，并进行验证， 如：甲基化转化率等； b)不含有亚硫酸氢盐转化组分的试剂盒，由制造商说明或指定转化试剂盒，并提供验证资料。 4.4 准确性 检测国家阳性参考品或企业阳性参考品，结果应为结直肠癌相应基因甲基化阳性。 阳性参考品的设置应包括不同甲基化比例的甲基化阳性的结直肠癌样本。 4.5 特异性 检测国家阴性参考品或企业阴性参考品，结果应为结直肠癌相应基因甲基化阴性。 阴性参考品的设置遵循以下原则： a）应包括肠镜结果无异常的正常人样本； b）应包括结直肠良性病变和临床常见的消化道良性疾病 （如肠道炎症）样本； c）应包括其他消化道肿瘤样本。 4.6 检测限 对于粪便样本检测试剂盒，检测浓度不高于2ng/ μL或基因组10ng背景下，甲基化比例不高于2%的 国家检测限参考品或企业检测限参考品，结果应为结直肠癌相应基因甲基化阳性。 对于血浆样本检测试剂盒，检测浓度不高于1ng/ μL或基因组30ng背景下，甲基化比例不高于1%的 国家检测限参考品或企业检测限参考品，结果应为结直肠癌相应基因甲基化阳性。 4.7 重复性 检测甲基化阳性的重复性参考品，平行检测10次，结果应均为结直肠癌相应基因甲基化阳性，且相 应检测通道Ct值的变异系数（CV,%）应不高于5.0%。 检测甲基化阴性的重复性参考品，平行检测10次，结果应均为结直肠癌相应基因甲基化阴性，且相 应检测通道Ct值的变异系数（CV,%）应不高于5.0%。 5 试验方法 5.1 外观 在自然光下，以正常视力或矫正视力目视检查，判定结果是否符合4.1 的要求。 5.2 核酸提取功能 2 适用时，按照制造商提供的方法进行试验，判定结果是否符合4.2 的要求。 5.3 转化功能 适用时，按照制造商提供的方法进行试验，判定结果是否符合4