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生物玻璃羟基磷灰石复合涂层促进骨生长的初步研究 1 生物玻璃/羟基磷灰石复合涂层 用阳离子石蜡膏治疗核电站的人工关节体已经使用了很长时间。结果表明，该涂层可以改善钛合金体的生物特性，促进体与骨的结合。但等离子喷涂导致的羟基磷灰石分解和涂层结合强度不高限制了植入体在体内的使用寿命,使目前假体的使用寿命一般在15年左右。前面研究显示,采用热膨胀系数与钛合金接近的生物玻璃作为过渡层,在低温烧结条件下制备的生物玻璃/羟基磷灰石复合涂层可改善涂层与钛合金的结合,提高结合强度。同时,低温烧结不会导致羟基磷灰石的分解、生物玻璃的析晶和钛合金金相结构的变化。体外实验证明该涂层良好的生物活性和细胞相容性。涂层的最终目的是在体内促进植入钛合金与骨的结合,提高其生物固定性能。在本实验中,研究了该生物玻璃/羟基磷灰石涂层在兔子体内与骨之间的结合与生物反应,为涂层的临床应用做好前期准备。 2 材料和方法 2.1 生物玻璃/羟基磷灰石复合涂层的制备 如图1所示的钛合金(Ti6Al4V)表面经过喷砂粗化处理后清洗干净。Ca-Si-B-P基生物玻璃粉体与羟基磷灰石粉体按0∶10、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5的比例混合,依次喷涂于钛合金表面,烧结制得生物玻璃/羟基磷灰石梯度复合涂层样品备动物实验使用。 2.2 羟基磷灰石/钛合金复合涂层的制备 选用新西兰雄兔,体重约2Kg,消毒后麻醉,在其股骨位切口,采用3mm的不锈钢钻在股骨近关节处钻孔,然后把涂好的样品植入,采用等离子喷涂羟基磷灰石涂层的钛合金样品和无涂层的钛合金样品作为对照,每组采用6个试样,术后缝合,然后饲养2,4,12,24周。 2.3 连续注射3天 麻醉清醒后不限制活动,手术后每日一次肌肉注射40万单位青霉素和4万单位庆大霉素,连续注射3天。术后2周和12周进行X-射线检查,观察植入体位置、稳定性及周围骨生长情况。 2.4 样品的制备和清洗 饲养到期的兔子被处死,取出带植入体的股骨,在中性甲醛溶液(4%)中固定4天,然后冲洗干净。采用80%,85%,90%,95%和100%的乙醇梯度脱水,最后在甲苯中浸泡4小时。处理好的样品采用聚甲基丙烯酸甲酯进行包埋,固化后进行切片。切片方向沿垂直于植入体轴向方向,切片厚度约为100 m,打磨成60 m的薄片后进行表面抛光,超声清洗。处理好的切片采用苦味酸-品红溶液染色,在光学显微镜下观察界面愈合、骨沉积及界面骨整合情况。 2.5 扫描电子观察 切片经乙醇梯度脱水后,最后采用醋酸异戊酯置换,在临界点干燥。处理好的切片采用扫描电镜(SEM)进行观察。 2.6 骨接触率和骨组织形态的测量 每个样品取3个切片,采用Bioquant软件对组织进行形态计量。计算骨接触率和凹槽内骨长入量,计算公式如下: 2.7 统计分析 结果中的数据为统计平均值,0.05为具有显著差异。 3 试验结果 3.1 涂层与骨的感染 从图2的X-射线图中可以看出,生物玻璃/羟基磷灰石涂层钛合金植入体在体内与骨结合良好,没有松动和滑脱,也未见感染现象,在涂层与骨周围没见放射透亮区。 3.2 植入体植物的组织结构 图3、图4、图5分别为生物玻璃/羟基磷灰石涂层、等离子喷涂羟基磷灰石涂层和无涂层的Ti6Al4V钛合金植入体切片的苦味酸-品红染色后的组织学照片。结果显示,在植入2周后,三种植入体周围和凹槽内都有编织骨形成。在生物玻璃/羟基磷灰石涂层植入体周围骨较密集,在凹槽内可见贴壁生长的骨质。钛合金植入体的骨主要集中在凹槽的开口处,在外围还可看见明显的纤维组织。到4周时后,各组植入体周围骨逐渐转变成板层骨,大多数集中在植入体壁上,每组植入体周围骨与假体的接触长度都在变长。生物玻璃/羟基磷灰石涂层植入体凹槽内骨量没有明显变化,而等离子喷涂羟基磷灰石涂层和Ti6Al4V植入体凹槽内骨量明显减少。12和24周后,各组植入体周围骨接触长度都在变长,骨组织完全生长成为板层骨。生物玻璃/羟基磷灰石涂层植入体凹槽内仍存在一定量的骨组织,而等离子喷涂羟基磷灰石和Ti6Al4V植入体凹槽内骨量则进一步减少。在整个实验阶段中,经过切片打磨和抛光处理后,生物玻璃/羟基磷灰石涂层与钛合金基体仍紧密结合,其结合界面上未发现裂痕出现,而在4周的等离子喷涂羟基磷灰石植入体的切片上,却可观察到涂层与钛合金基体脱离的现象,如图4 B中的箭头所示。 3.3 骨与植入体的结合 图6为植入12周后植入体截面切片的高倍扫描电镜照片,从该图中可以看出骨与植入体结合的细节。生物玻璃/羟基磷灰石涂层和等离子喷涂羟基磷灰石涂层都与骨结合紧密,结合界面上未见缝隙,而Ti6Al4V合金与骨的结合界面上却存在一条明显的缝隙。 3.5 植入时间的延长 图7为各植入体在植入不同时间段后与骨的接触率比较。从图中可以看出,各植入体与骨的接触率随植入时间的延长在不断