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脉冲电磁场对dop大鼠骨形态学及血清学指标的影响 近年来，由于长期卧床、刹车和长期超载，残余性骨质疏松症（dop）的发病率逐渐增加，给人们的家庭和社会带来了沉重的负担。预防和治疗残余性骨质疏松症已成为医学领域的研究热点。有研究报道, 脉冲电磁场 (pulsedelectromagnetic fields, PEMF) 可以有效增加废用性骨质疏松的骨量。本研究旨在观察PEMF对废用性骨质疏松骨组织形态学及血清学指标的影响, 探讨PEMF治疗废用性骨质疏松疾的可能机制, 以期为PEMF的临床应用提供更多的理论依据。 1 材料和方法 1.1 药物和试剂 大鼠 (RAT) 骨钙素OT/BGPELISA检测试剂盒购自武汉博士德公司, 阿仑膦酸钠购自杭州默沙东制药有限公司。 1.2 实验动物及动物 清洁级SD大鼠, 雌性, 体重250 g~280 g由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供, 合格证号SCXK- 吉2007-0003。 1.3 自动生化分析方法 生物切片自动化系统 (德国;莱卡显微镜) , 成像系统 (DM4000B, 德国) , BECKMAN自动生化分析仪, 哈尔滨医科大学附属第四医院脉冲磁场系统, 信号发生器输出波形为脉冲方波, 频率10Hz, 亥姆霍兹线圈, 直径240 mm, 铜线直径0.9 mm, 单包匝数200 匝, 当线圈通电电流为1A时中心磁场强度为15GS。本装置与哈尔滨工业大学联合研制, 已通过哈尔滨医科大学申请获得国家专利。 1.4 模型建立及改良 1.4.1 分组将实验大鼠按体质量随机抽样分为四组:正常对照组INT组、废用模型组DOP组、药物治疗组ALN组、脉冲电磁场组PEMF组, 每组20 只, 除正常对照组外, 其余大鼠通过改良胫骨- 尾部固定法制动建立模型废用性骨质疏松模型, 各组大鼠体质量无统计学差异 (P0.05) 。大鼠右下肢制动两周后, 随机抽取5 只大鼠使用双能X线骨密度仪 (小动物软件) 对右股骨近端进行骨密度扫描, 确定废用性骨质疏松模型成功后, 进行治疗。药物治疗组 (ALN组) 大鼠灌胃予以阿仑膦酸钠 (1 mg·kg-1·d-1) 治疗, PEMF组大鼠予以PEMF照射40 min·d-1治疗, 磁场参数3.82 m T, 10 Hz。在治疗后2、4、8、12 周时各组分别取5 只大鼠, 进行血清学等指标的检测和骨组织形态学观察。 1.4.2 模型建立废用性骨质疏松模型在传统胫骨- 尾部固定法基础上, 加以改良, 具体步骤:大鼠行腹腔注射水合氯醛30mg·kg-1麻醉, 在距离肛门大约1 cm尾根部用医用胶带缠绕, 医用胶带减轻铁丝压迫, 加大铁丝固定受力面。后用粗细适中医用铁丝穿过右后肢胫骨远端约1 cm处, 大鼠右后肢紧贴尾部右侧上方, 医用铁丝置于尾根部胶带上, 将铁丝弯折成类似“∝”形, 铁丝两端用钳子拧住, 拧至松紧适中, 不易滑脱为止。医用胶带能有效减轻铁丝压迫, 加大铁丝固定受力面。并随着老鼠的生长调节老鼠尾部医用钢丝的松紧度。各组大鼠置于大鼠专用饲养笼, 每笼5 只, 饲养环境通风良好、室温20℃~22℃、湿度60%~70%、12~12 h间隔照明。标准大鼠饲料喂养 (钙、磷含量分别为0.51%和0.42%) , INT组大鼠喂养DOP大鼠饲料消耗量的平均水平, 以防止体重差异过大影响结果评价, 自由饮水。 1.5 试验组和方法 1.5.1 胫骨近端组织电镜下观察大鼠麻醉后, 取右下肢胫骨近端约1CM, 仔细剔除软组织, 使用3%戊二醛和4%多聚甲醛固定待检, 临检胫骨制备切片, 使用扫描电镜观察。 1.5.2 血清学指标测定大鼠麻醉后, 右心室穿刺取血, 3000r/min离心后收集血清, -70℃低温冰箱保存待测。骨钙素采用ELISA方法检测, 按照说明书进行操作。其余指标由生化分析仪常规检测。 1.6 比较方法及统计学 采用SPSS软件对数据进行统计, 计量资料以ue0af±s表示, 多组间的比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用t检验, 以P0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 两组骨小梁排列、排列 建模后4 周, DOP组制动侧胫骨近段病理切片电镜下观察, 骨小梁显微结构呈退行性改变, 骨小梁数量的减少, 厚度变薄, 骨小梁间隔大, 板型的网状结构断裂, 骨体积减小;而ALN组骨小梁排列较DOP组紧密、整齐, 骨小梁间隔较大, 网状结构断裂程度较轻。 建模后12 周, PEMF组较ALN组, 骨小梁排列整齐有序, 骨小梁数目增多, 网状结构完整, 骨小梁体积增大, 厚度增厚。 2.2 各组bgp、alt的比较 治疗2 周后, 与INT组相比, 其余各组血清钙水平无明显差异 (P0.05) , 血磷明显降低 (P0.05 或p0.01