药学分子生物学：第三章 转录及其调控.pptVIP

真核生物转录调控的特点 有多种RNA聚合酶（RNA polⅠ、Ⅱ、Ⅲ），单独没有活性，必须与转录因子共同作用 通过顺式作用元件和反式作用因子调节转录的起始 转录激活状态的染色质结构发生明显变化 正性调控占主导地位 真核生物转录前调控 染色质结构对转录的影响：具有转录活性的活性染色质 染色质DNA对DNaseⅠ更敏感 正转录的DNA甲基化程度降低 常缺乏组蛋白H1，其他核心组蛋白则被乙酰化或与泛素相结合而修饰 非常活泼的转录区，如许多真核生物的rRNA基因处，没有核小体结构 DNA的修饰：甲基化与去甲基化 DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。 甲基化常发生在基因5′侧区的CpG序列中，阻碍转录因子与DNA特定部位的结合 真核生物转录水平调控 真核生物通过顺式作用元件和反式作用因子相互作用实现转录调控 顺式作用元件(cis-acting element)：与相关基因处于同一DNA分子上，能起调控作用的DNA序列。包括启动子、终止子、增强子、衰减子等 反式作用因子(trans-acting factor)：一个基因的产物(蛋白质或RNA) ，通过与特异的顺式作用元件相互作用，对另一个基因的表达具有调节作用 顺式作用元件 启动子（promoter）：RNA聚合酶结合并起动转录的DNA序列 ①核心启动子 ： 指RNA聚合酶起始转录所必需的最小的DNA序列 ②上游启动子元件： 包括-70bp附近的CAAT盒和GC盒以及距转录起始点更远的上游元件。 增强子(enhancer)：远离转录起始点、决定基因的时间、空间特异性、增强启动子转录活性的DNA序列 增强基因转录效应十分明显 发挥作用与其方向或转录起始点的距离无关 大多数为100-200 bp重复序列，其基本核心组件常为8-12bp 没有基因专一性 有严格的组织细胞特异性 活性与其在DNA双螺旋结构中的 空间方向性有关 许多增强子作用的发挥还受外部信号驱使 增强子的特点 沉默子(silencer)：负性调节元件。当其DNA序列与特异蛋白因子结合后，可阻断转录起始复合物的形成和活化，使基因表达的活性受到抑制。功能不受距离和取向的限制 DNA结合域 转录激活域 TF 蛋白质-蛋白质结合域 （二聚化结构域） 谷氨酰胺富含域 酸性激活域 脯氨酸富含域 反式作用因子 螺旋—回折—螺旋(helix-turn-helix ，HTH) 锌指结构(zinc finger) 亮氨酸拉链(leucine zipper, bZIP) 碱性－螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix, bHLH) β-片层和环结构 转录因子的DNA结合域 螺旋—回折—螺旋(HTH) 由两个短α螺旋和β转角构成 通过识别螺旋识别并与DNA大沟结合 也称为同源结构域，参与个体发育 锌指结构(zinc finger) 一组保守的氨基酸残基和锌离子结合，形成可以进入DNA双螺旋大沟的指状结构 两种类型：Cys2/His2; Cys2/Cys2 Cys2/His2 Cys-X2-4-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2- His-X3-His 类固醇受体DNA结合域Cys2/Cys2 Cys-X2-Cys-X13-Cys-X2-Cys 亮氨酸拉链(bZIP): 每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基 以二聚体形式与DNA结合，两个蛋白质α螺旋上的亮氨酸靠近而形成拉链样结构 碱性－螺旋-环-螺旋(bHLH)： 由40-50aa组成，含有两个两性α螺旋，负责二聚体的形成 bHLH蛋白含碱性序列，它在HLH基序附近，负责结合DNA ⑤β片层和环结构 富含谷氨酰胺的结构域 富含脯氨酸的结构域 带负电荷的α螺旋结构域，增加激活区的负电荷能提高激活转录的水平 含有双性α螺旋和酸性氨基酸的结构域 转录因子的转录激活域 真核生物转录起始复合物的形成 真核生物转录终止调控 HIV基因组转录终止调节：Tat蛋白抗终止作用 热休克蛋白基因的转录终止调节：环境温度升高或其他应激条件下，热休克转录因子快速激活，使HSP70和其他热休克蛋白转录达到最高水平 真核生物转录后调控 对hnRNA的剪接和加工、mRNA由胞核向胞质的转运及定位、mRNA的稳定性、RNA编辑 mRNA的半衰期影响蛋白合成的量 转录调控 基因表达是多级水平上进行的复杂事件，分为： 转录水平、转录后水平（加工及转运）、翻译水平及翻译后水平，但以转录水平的基因表达调控最为重要 转录调控涉及特异的转录调节蛋白与转录调控区DNA之间的相互作用，可产生正或负的调控效果 * 转录按A＝U、C≡G 配对的原则，合成RNA分子 不对称转录，即某一基因只以一条单链DNA 为模板进行转录(RNA聚合酶与DNA双螺旋的两条链的结合并不对称，这与单链转录是一