柴胡（柴胡）煮散饮片标准文本.pdfVIP

柴胡 （柴胡）煮散饮片 1 范围 本文件规定了柴胡 （柴胡）煮散饮片的检测标准。 本文件适用于柴胡 （柴胡）煮散饮片的质量控制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 （1） 《中华人民共和国药品管理法》 （2） 《中华人民共和国中医药法》 （3） 《中华人民共和国药典》 （4） 《国家药品标准工作手册》 （5） 《广东省中医药条例》 （6） 《GB/T6003.12012 试验筛 技术要求和检验》 （7） 《中药煮散饮片质量标准研究指导原则和技术要求》 （试行） 3 术语和定义 3.1 来源 伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.干燥根炮制成饮片后的加工品。 3.2 中药煮散饮片 中药煮散饮片是将中药饮片按规定制成一定大小的颗粒状物，供调配或医院制剂使用。 4 规范性技术要素 【制法】 取柴胡，制成粒度为0.8～10.0mm的煮散饮片，即得。 【性状】 本品呈不规则小块或颗粒形，粒径0.8～10.0mm，表面黄棕色至深棕色，气微，味苦。 【鉴别】 （1）本品粉末灰棕色。木纤维较多，成束或散在，无色或淡黄色。直径8～17µm。导 管主为网纹、双螺旋纹导管，偶见网状具缘纹孔导管。薄壁细胞单个散在或数个成群。呈长圆形、类长 1 方形或长条形，直径14～46µm，长23～168µm，壁稍厚，纹孔大小不一，有的甚大，横长排列，孔沟 明显。 （2）薄层色谱鉴别或DNA 条形码鉴定 薄层色谱鉴别 取本品粉末0.5g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供 试品溶液。另取北柴胡对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照 品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法 （中国药典2020年版通 则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水 （8 ∶2 ∶ 1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色 清晰，分别置日光和紫外光灯 （365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。 DNA 条形码鉴定 模板DNA 提取 取本品适量，研成细粉，用植物基因组提取试剂盒提取供试品模板DNA 溶液， 置-20℃保存备用。另取北柴胡对照药材适量，同法制成对照药材模板DNA 溶液，置-20℃保存备用。 PCR反应 ITS2 条形码通用引物：ITS2F （5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT -3′）和ITS3R （5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′）。PCR 反应体系：在200μl离心管中进行，反应总体积为25μl， 反应体系包括2×TaqPCRMix 12.5μl，通用引物 （10 μmol/L）各1μl，模板 （基因组DNA＜0.1μg）2μl， 无菌超纯水8.5μl。将离心管置PCR仪，ITS2条形码PCR反应参数：94 ℃预变性5分钟，循环反应40次（94 ℃ 30秒，56℃30秒，72 ℃45秒），延伸 （72 ℃）10分钟。另取无菌超纯水，同法上述PCR反应操作，作 为空白对照。 电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法 （中国药典2020年版四部通则0541），凝胶浓度为1.5%，凝胶中加 入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品、对照药材与空白对照PCR反应溶液的上样量分别为5μl，DNA分子 量标记上样量为2μl （0.5μg/μl）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品 及对照药材凝胶电泳图谱中，在约500bp同一位置处应有一条DNA条带，空白对照无条带。 测序 在紫外光灯下迅速切取500bp处目的条带所在位置的凝胶，采用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 进行纯化。以PCR扩增引物作为测序引物，使用DNA测序仪对目的条带进行双向测序。 中药材DNA条形码序列获得 对双向测序峰图应用有序列拼接功能的专业软件进行序列拼