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不同产地初加工杜仲叶hplc指纹图谱研究 杜仲叶是杜仲科植物的杜仲叶。它对肝、肾、肌肉和骨骼都有很好的疗效。这是一种具有两种药物作用的中药。它含有绿原酸和其他苯丙素，如紫微酸、景尼平素酸、景尼平素酸、桃叶珊瑚酸、二棕榈醇糖苷和黄酮类。但杜仲叶采摘鲜运困难,因此其产地初加工方式,直接影响到药材的质量及深度开发,其初加工方式的选择也成为GAP实践中的关键问题之一。《中国药典》2010年版一部中规定杜仲叶的产地初加工方式为晒干或低温烘干。但其理论依据是什么,以上2种技术是否为最佳初加工方式,不同初加工方式对杜仲叶有效成分的影响究竟有多大,这些问题都亟待解决。鉴于此,本实验以杜仲叶为研究对象,通过HPLC指纹图谱的建立和绿原酸、京尼平苷酸成分量及醇浸出物量的测定,首次系统比较分析了不同初加工方式对杜仲叶品质的影响,以期筛选出适于杜仲叶药材的产地初加工技术,为提高和控制杜仲叶的质量奠定理论和技术基础。 1 试剂与仪器 LC—10ATVP高效液相色谱仪(配备SPD—M10AVP光电二极管阵列检测器和CLASS-VP色谱工作站,日本岛津);AE240型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);KQ3200型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);SQ2119B型多功能食品粉碎机(上海帅佳电子科技有限公司);格兰仕G8023YSL—V1型微波炉(佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司);DHG—9240A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精密实验设备有限公司);SK2103电磁炉(美的集团)。 对照品绿原酸(批号110753-200413,质量分数98%)、京尼平苷(批号110749-200613,质量分数98%)、咖啡酸(批号110885-200302,质量分数98%)均购自中国药品生物制品检定所,桃叶珊瑚苷(批号MUST质量分数98%)、松脂醇二葡萄糖苷(批号MUST质量分数98%)、京尼平苷酸(批号MUST质量分数98%)、芦丁(批号MUST质量分数98%)均购自成都曼思特生物科技有限公司。乙腈(色谱纯,美国Tedia公司);磷酸(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心);水为双蒸水;其余试剂均为分析纯。杜仲叶鲜品于2012年7月采自湖南省长沙市含浦镇,经湖南省中医药研究院中药研究所谢昭明研究员鉴定为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的新鲜叶。 2 方法 2.1 采用不同的加工方法对杜仲叶样品进行制备 通过参考文献方法及预试验筛选,本实验采用了下述几类初加工方式。 2.1.1 自然干燥和干燥 取杜仲叶鲜品2份,每份50g,分别于室内通风处自然阴干、日光下晒干,备用。 2.1.2 杜仲叶的蒸制 于直径56 cm不锈钢锅内加1.5 L蒸馏水,开始沸腾后5 min,取杜仲叶鲜品3份,每份50 g,平铺于不锈钢制篦子上分别蒸5、10、20min,取出擦干,再自然阴干备用。 2.1.3 制泡沫 取杜仲叶鲜品5份,每份50 g,分别于沸水中烫漂1、2.5、5、10、20 min,取出擦干,再自然阴干备用。 2.1.4 不同温度对制备嘴唇的影响 取杜仲叶鲜品9份,每份50 g,置于直径为56 cm的炒锅内在电磁炉上分别于100、130、160℃下炒制,每个温度下各炒1、3、5 min,取出,自然阴干备用。 2.1.5 加热温度对培养热电鼓风干燥设备的影响 取杜仲叶鲜品9份,每份50 g,分别平铺于瓷托盘上,放入电热鼓风干燥箱内,分别于80、100、120℃下加热,每个温度下各加热10、20、30 min,取出,自然阴干备用。 2.1.6 地位加热的确定 取杜仲叶鲜品9份,每份50 g,分别平铺于微波炉玻璃托盘上在低、中、高火力加热,不同火力下各加热1、2.5、5 min,取出,自然阴干备用。 将以上不同初加工方式制得的样品及杜仲叶鲜品进行编号,具体见表1。 2.2 hplc-keyhook-keyphone特征的构建 2.2.1 u3000梯度洗脱时间 色谱柱为Promosil C18柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱时间为75 min:0~40 min,6%~16%乙腈;40~75 min,16%~28%乙腈;扫描波长200~400 nm,检测波长208 nm,体积流量0.8mL/min,柱温25℃,进样量10μL。 2.2.2 对照品储备液制备 分别精密称取桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、咖啡酸、松脂醇二葡萄糖苷和芦丁对照品适量,制成对照品储备液冷藏备用;再分别吸取一定量对照品储备液,加甲醇制成质量浓度分别为桃叶珊瑚苷0.61 mg/mL、京尼平苷酸0.62 mg/mL、绿原酸0.62 m