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数字全息成像技术在生物医学领域的应用 1 数字全息成像的基本原理 在生物和生命周期研究中，我们希望能够在玻璃罐体的培养液中观察和观察生物细胞，了解细胞的结构形状、动态特征、生物化学参数、细胞之间的相互作用、细胞对药物的反应和转移信息，这对早期医学诊断和药物设计开发非常重要。然而, 当前的定性、二维和较慢成像速度的显微成像方法已经不能满足生物医学研究和发展的需求, 迫切需要可实现定量、三维和快速跟踪的成像方法。由于生物细胞一般为相位型或者类相位型物体, 只能提供振幅像的传统光学显微镜很难清晰分辨细胞边缘, 且其成像焦深较短, 每次聚焦只能获取物体的二维图像, 对样品的厚度、位置以及三维形貌的观测非常困难。为了提高细胞成像的对比度, 人们提出了荧光显微镜, 但使用该显微镜前需要利用罗丹明、吖啶橙或绿色荧光蛋白等物质对生物细胞进行染色预处理［１］, 此预处理增加了操作的复杂度, 且不可避免地会影响生物细胞的生理特性。为此, 各种光学相衬显微成像方法得到快速发展, 如广泛使用的泽尼克相衬显微镜、微分相衬显微镜、激光共焦显微镜和光学相干层析术等［２－３］。但随着生物医学和生命科学的迅速发展, 这些方法已经不能满足对生物活细胞的动态定量观测需求, 例如泽尼克相衬显微镜和微分相衬显微镜的基本原理是把相位信息变换成强度信息, 该变换一般是非线性的, 因而测量的相位信息只是定性的。激光共焦显微镜和光学相干层析术虽然可以进行物体的三维形貌测量, 但这两种显微镜都需要对样品进行精确扫描, 导致成像系统的结构十分复杂, 且成像历时长, 不能实现实时动态测量。在以上技术基础上也提出了其他改进的全视场定量相衬成像方法, 如希尔伯特变换相位显微术 (HPM) 、傅里叶变换相位显微术 (FPM) 和衍射相位显微术 (DPM) 等［４－７］。然而, 在这些方法中, 有的需要扫描镜和平移台等机械运动装置, 系统结构复杂, 有的则需要波前传感器及多次曝光。 数字全息术利用面阵光电探测器 (如CCD、CMOS) 代替传统光学全息记录介质 (如银盐干板、感光胶片) , 将全息图以数字化的形式存储于计算机中;然后计算机运用衍射传播理论模拟全息再现时光波的传输过程, 通过数值计算得到定量的物光波场的振幅和相位分布, 实现了全息图记录、存储和再现全过程的数字化。数字全息技术具有如下的优势［８－１２］:1) 实时性:光电图像传感器能够记录运动物体的各个瞬时状态, 再现过程省去了繁琐的化学湿处理过程, 提高了图像信息处理速度, 可用于实时处理的场合;2) 信息丰富:利用单幅全息图就能定量地得到被记录物体再现像的振幅和相位信息, 不仅可以得到反射型物体的形貌分布, 还适用于透明或半透明物体的定量相衬成像;3) 结构简单:无需任何扫描装置即可对微小物体进行无损检测, 同时可以方便调节再现距离得到不同再现距离下的物光波分布, 对物空间进行逐层成像, 实现全场观察与测量;4) 灵活性:可利用现代数字图像处理技术处理数字全息图, 减少或消除在全息图记录过程中的像差、噪声与畸变等因素的影响, 提高再现像质量;5) 无损性:数字全息无需像荧光显微镜那样要对待测样品进行染色等预处理。综上可见, 数字全息成像是一种新型的实时、非破坏性的全视场三维定量相衬成像方法。 数字全息显微成像 (DHM) 的横向分辨率取决于系统的数值口径, 可以达到亚微米量级, 而轴向分辨率可以达到亚纳米量级［１３－１５］。并且由于数字全息技术具有非破坏性和实时性, 特别适合于无染色剂标记生物活细胞的定量相衬成像和三维重建, 可实时获得细胞形貌和功能分析, 这将为生物医学的研究提供各种定量参数, 例如细胞的新陈代谢、生死、凋亡、可塑性、信号传输, 细胞膜或细胞质的移动, 细胞动力过程研究以及生物组织的成像等。近几年来引起了国内外科研人员的高度重视, 并逐步应用到了生物学和医学成像等研究领域。 本文针对生物医学方面的应用, 介绍了生物细胞的数字全息相衬成像原理, 从细胞形貌测量、生物学参数、生理状态、药效反应和动力学分析几方面, 综述了数字全息成像方法在生物医学领域中的研究和应用进展, 讨论了数字全息在生物医学方面的发展前景和存在的技术问题。 2 u3000细胞相位畸变校正 数字全息作为一种定量的相衬成像方法, 其本质是测量待测样品的透射光束或反射光束的相位延迟的光学相干成像方法。一般体外检测的生物细胞需要在培养液中生长, 以图1中的透射生物样品检测为例, 当光通过活体细胞这种相位型样品时, 光强度变化非常小, 因此细胞的振幅信息不能清晰地体现细胞结构。但是光在活体细胞和细胞周围物质中的传播速度不同, 会产生相应的相位延迟。 式中λ为入射光波波长, z为轴向坐标, hｍ和nｍ分别为细胞培养液的高度和折射率, hｃu3000