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植物细胞凋亡的形态学变化及其机制 细胞死亡是指多细胞生物在发育过程中或因某些环境因素而发生的、积极死亡的方式。它对于生物体的正常发育、自稳平衡及多种病理过程具有极其重要的意义。细胞凋亡的概念由Kerr于1972年提出,当时用来描述某些类型细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,主动地结束其生命,最终脱落离体或裂解为若干凋亡小体而被其它细胞所吞噬的过程。细胞凋亡的主要特征包括:染色质凝集、质膜出芽、核裂解及凋亡小体的形成。 在植物的发育过程和防御机制中,由基因控制的细胞凋亡也发挥着重要作用。近年来,越来越多的证据表明,无论是在植物的生长发育过程(包括根冠细胞、导管分子、绒毡层细胞、大孢子细胞等),还是在超敏反应(hypersensitive reaction)中,都普遍存在着细胞凋亡现象。其中,管状分子(如导管和筛管)的研究一直是关注的重点。导管和筛管是植物体内输导组织的主要成分,负责水分、无机盐和有机物质的输送。有关导管和筛管发育的形态学资料非常丰富,尤其是导管,已经成为研究植物细胞凋亡的模式材料。目前已经分离了2个编码半胱氨酸蛋白酶的cDNAs、p48h-17和ZCP4,以及与DNA断裂有关的核酸酶的cDNA克隆BEN1和ZEN1。可以说,导管细胞凋亡的证据已经非常充分,但其信号传导通路正在研究中。有关筛管细胞凋亡的探讨目前仅停留在形态学观察上,虽然筛管的发育过程呈现了细胞凋亡的典型特征,如染色质凝集和边缘化、核膜破毁、大量膜泡出现等,但少量细胞质(线粒体和质体)的保留体现了筛管的发育不同于导管,具有其特有的凋亡途径。导管和筛管的不同凋亡途径与其所执行的生理功能密切相关,了解和研究管状分子分化过程中的细胞凋亡现象及其信号传导途径对进一步阐明细胞凋亡的机制以及在发育生物学中的作用具有非常重要的意义。 本文对植物细胞凋亡的形态特征和机制进行综述,着重阐述管状分子发育中细胞凋亡的研究现状和进展,并对两种管状分子(导管、筛管)的凋亡机制进行探讨,为进一步阐明植物细胞凋亡的机制提供理论基础。 1 植物细胞凋亡 动物细胞凋亡的形态特征包括以下3个细胞学标准:(1)核内DNA断裂和染色质的凝集;(2)出现凋亡小体;(3)凋亡小体的吞噬。 植物细胞凋亡的形态有部分与动物相似,如细胞核和细胞质的凝集和固缩,核内DNA的片断化通常可以显示TUNEL阳性反应和DNA梯状条带(DNA ladder)等。但这3条标准并不能完全反映植物中的细胞死亡现象,如植物细胞中鲜有凋亡小体发现。在铝诱导的大麦根冠细胞的死亡以及导管发育过程中,均未发现凋亡小体的形成。植物与动物细胞凋亡最明显的不同在于细胞死亡后产物的去向,动物中都是被邻近的细胞所吞噬,植物的机制可能涉及细胞自溶,或者用于本身细胞壁的构建。总之,植物细胞凋亡具有染色质固缩和边缘化、DNA片断化、核的降解、细胞质的改变包括质膜内缩、大量囊泡的出现、细胞壁的修饰等特征。 2 细胞凋亡parp和细胞色素c 动物细胞中的凋亡通路是一个复杂的过程,简单说有两种主要途径。一种是细胞表面死亡受体接受死亡信号后形成死亡诱导信号复合物,而使细胞凋亡的起始者(caspase 2,8,9,10)活化,再激活下游的执行者(caspase 3,6,7),从而执行对死亡底物的酶解;另一种与线粒体中细胞色素C有关,细胞色素C从线粒体到胞质的释放是通过Bcl-2蛋白家族调控的。释放的细胞色素C与胞质中的dATP和Apaf-1结合,诱导caspase 9的活化,从而引起细胞内关键底物的裂解(如PARP),直接导致上述细胞凋亡形态学的变化(图1)。 植物细胞凋亡机制的研究起步较晚,虽然与动物细胞凋亡相比具有一定的相似性,但是许多证据表明,植物细胞凋亡的相关基因和蛋白质序列与动物细胞相比,只存在部分同源性,这也是目前植物细胞凋亡机制研究的热点。关于植物细胞凋亡机制的研究现状可以归纳为以下两个方面。 2.1 植物细胞中caspase的结构及功能变化 动物细胞的凋亡是由一系列特异的半胱氨酸蛋白酶(caspase)调控的,已有证据表明植物细胞凋亡过程中也发生类似caspase的活化。Olga等用caspase特异性抑制剂Ac-YVAD-CMK(caspase-1抑制剂)和Ac-DEVD-CHO(caspase-3抑制剂)消除了烟草的细胞凋亡,第一次在细菌诱导的烟草细胞中检测到类似caspase的活性,表明caspase的活化对细胞死亡起了重要的作用。Anke等在化学物质喜树碱、星形孢菌素、串珠镰孢菌素诱导的番茄悬浮细胞凋亡中也发现了caspase-1和3的活性。 植物细胞中有两类caspase:液泡处理酶(VPE)和准半胱氨酸蛋白酶(metacaspase),这两种蛋白酶的序列和三级结构与动物的caspase有关,并且具有caspase