胎盘型谷胱甘肽s转移酶和dna拓朴酶在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系.docxVIP

胎盘型谷胱甘肽s转移酶和dna拓朴酶在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系 骨肉瘤是青少年常见的骨肿瘤。骨肿瘤对化疗不敏感, 预后差, 其机制较为复杂, 可能与肿瘤多药耐药性 (Multi-drug resistance, MDR) 有关。近年研究表明, 胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶 (GST-π) 和DNA拓朴酶Ⅱ (Topo Ⅱ) 等多种细胞内酶是恶性肿瘤产生MDR的物质基础, 但其在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系国内外报道较少。为此, 本研究用S-P法检测40例骨肉瘤中GST-π和Topo Ⅱ的表达, 以期探讨其与预后的关系。 1 材料和方法 1.1 母细胞型及细胞型的检测 选取本校附一、二院及重庆市肿瘤医院1985-1994年间骨肉瘤标本40例, 其中包括骨母细胞型22例, 软骨母细胞型10例及纤维母细胞型8例。所有标本均经10%中性福尔马林液固定, 常规石蜡包埋, 5 μm连续切片, 分别行HE及S-P免疫组化染色。 1.2 临床数据 40例骨肉瘤患者, 男性28例, 女性12例。年龄13～64岁。术前化疗13例, 术前未化疗27例。 1.3 免疫试剂和模型 5 μm连续石蜡切片, 行S-P免疫组化染色, 具体步骤参照试剂盒说明书进行。鼠抗人GST-π和Topo Ⅱ单克隆抗体, S-P免疫组化、二氨基联苯胺 (DAB) 显色试剂均购自北京中山生物技术公司。进行S-P免疫组化染色前切片需经微波炉修复抗原。阴性对照用PBS代替一抗, 阳性对照由公司提供。 1.4 统计处理 计数资料两组间比较采用χ2检验, 用SPSS8.0统计软件计算,P0.05表示相差显著,P0.01表示相差非常显著。 2 结果 2.1 年生存率 本组全部病例均有随访资料, 随访最长时间为12年, 最短为1年, 平均为3.35年。2年总生存率为65%。随访病例中, GST-π、Topo Ⅱ在骨肉瘤内呈高表达型者, 其复发转移和生存时间短, 而低表达型者, 其复发转移和生存时间有相对延长的趋势。 2.2 关于toe阳性产物的测定 GST-π阳性产物定位于胞浆和胞膜, 部分瘤细胞胞核中亦可见阳性产物;Topo Ⅱ阳性产物主要定位于胞核, 部分瘤细胞胞浆中亦可见阳性产物, 见图1, 2。骨肉瘤GST-π和Topo Ⅱ阳性率分别为82.5% (33/40) 和52.5% (21/40) 。 2.3 两组患者tpre,tpre比较 见表1, 术前未化疗组 (Npre) GST-π阳性表达率为88.9% (24/27) , 高于术前化疗组 (Tpre) 69.2% (9/13) , 但无显著性差异 (P0.05) ;术前化疗组Topo Ⅱ阳性表达率为38.5% (5/13) , 显著低于术前未化疗组77.8% (21/27) (P0.05) 。 2.4 年以上组与2年以上组生物资本合作组2.3%两组 见表2, 骨肉瘤患者存活2年以内组 (Group 2-) 阳性表达率分别为92.3% (24/26) 、69.2% (18/26) , 均显著高于存活2年以上组 (Group 2+) 64.3% (9/14) 、21.4% (3/14) 。 各型骨肉瘤中GST-π和Topo Ⅱ表达没有显著差异, 见表3。 3 gst-与肺癌mdr的关系 术后新辅助化疗已经成为治疗骨肉瘤的重要手段之一, 一定程度上改善了骨肉瘤的治疗效果, 提高了患者5年生存率, 但随之而来的是肿瘤细胞对化疗药物的耐药问题, 目前认为是化疗失败的重要原因之一, 而有关其机制, 国内外研究较少。 肿瘤细胞在药物诱导条件下的各种改变都是为了抵抗药物杀灭、保护自身生存而改变的结果, 因此, 一般认为耐药是多种机制共同作用的结果。Wunder等发现骨肉瘤及骨肉瘤细胞株中MDR1高表达, 提示骨肉瘤存在耐药。 MDR有两种不同的表型, 一种是对第一次化疗就产生耐药, 称之为原发性耐药;另一种是在化疗过程中产生耐药, 称之为继发性耐药。 研究表明, MDR与GST-π和Topo Ⅱ等多种细胞内酶有关。GST是一组具有多种生理功能的蛋白质超基因家族, 可分为α、μ、θ、π及膜结合微粒体5种类型, 其中GST-π与恶性肿瘤MDR关系最密切。在结肠癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌等恶性肿瘤中GST-π表达均增高, 而在肝癌、肾癌、前列腺癌等表达极低或不表达。本研究发现骨肉瘤GST-π阳性表达率为82.5% (33/40) , 各型骨肉瘤中GST-π的表达没有明显差异, 而术前未化疗组GST-π阳性表达率为88.9% (24/27) , 高于术前化疗组69.2% (9/13) (P0.05) , 说明GST-π表达不受化疗药诱导, 主要参与原发性耐药。谷贵山等通过实验得到的结果与本实验结果相似。 ToPo Ⅱ是一种核酸酶, 可促进肿瘤细