流感病毒h7n9型裂解疫苗的动物局部安全性评价.docxVIP

流感病毒h7n9型裂解疫苗的动物局部安全性评价 流感病毒梭形哨所[9例：细菌、前体和结论]是根据世界卫生组织（who）推荐并提供的抗癫痫药物nib-268[a.a.a.2013（9））提出的流感病毒丝和鸡育种饲料。它是在鸡育种中制备的。该疫苗由北京科兴生物制品有限公司研制, 可刺激机体产生针对H7N9型流感病毒的抗体, 临床上人拟定给药途径为上臂三角肌肌内注射。为了用药安全, 本研究依据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》《化学药物急性毒性研究技术指导原则》《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》和《预防用生物制品临床前安全性评价技术审评一般原则》, 采用肌肉刺激性试验、全身主动过敏性试验和急性毒性试验对流感病毒H7N9型裂解疫苗进行临床前安全性评价, 为临床应用提供试验依据。 1 材料和方法 1.1 试剂与仪器 流感病毒H7N9型裂解疫苗 (批号201308002) 和氢氧化铝佐剂 (批 均由北京科兴生物制品有限公司提供;氯化钠注射液 (9 mg/m L, 批 由国药集团容生制药有限公司提供;水合氯醛 (批 , 乌来糖 (批号 和牛血清白蛋白 (批 均购自国药集团化学试剂有限公司。 1.2 小鼠异形小鼠harting 普通级大耳白家兔, 体质量2.0~2.5 kg, 雌雄不限, 实验动物质量合格证号为11400700028398, 生产许可证号为SCXK (京) 2010-0002。SPF级Hartley豚鼠, 体质量300~350 g, 雌性各半, 实验动物质量合格证号为11400700029000 (雄) 、11400700029003 (雌) , 生产许可证号为SCXK (京) 2012-0001。SPF级ICR小鼠, 体质量19~22 g, 雌雄各半, 实验动物质量合格证号为11400700027847, 生产许可证号为SCXK (京) 2012-0001。以上动物均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。 1.3 阴性对照的制备 取健康家兔12只, 随机分为流感病毒H7N9型裂解疫苗组和氢氧化铝佐剂组, 6只家兔右侧后肢股四头肌im流感病毒H7N9型裂解疫苗, 0.5m L/只;另外6只家兔以相同的方式注射氢氧化铝佐剂, 0.5 m L/只。采用自身对照的方式, 所有家兔左侧后肢相同部位im等体积氯化钠注射液, 作为阴性对照组。1次/d, 连续给药2 d。末次给药后48 h, 流感病毒H7N9型裂解疫苗组和氢氧化铝佐剂组各取4只家兔, 以及末次给药后第25天取剩余家兔, 20%乌来糖溶液5 m L/kg静脉麻醉致死后, 纵向切开股四头肌, 肉眼观察注射部位周围的刺激反应, 按“肌肉刺激反应分级标准” (表1) 计算平均反应级, 然后用4%中性甲醛溶液固定, 常规脱水, 石蜡包埋, 切5μm薄片, HE染色, 光镜下做局部肌肉病理组织学检查, 另一侧阴性对照肌肉也同法处理。 平均反应级=剖检动物反应分级总和/剖检动物数 1.4 肌肉注射给予大鼠的急性毒性试验 取24只健康豚鼠, 雌雄各半, 按体质量随机分为阴性对照组 (氯化钠注射液) 、阳性对照组 (10mg/m L牛血清白蛋白) 、氢氧化铝佐剂组和流感病毒H7N9型裂解疫苗组。另取4只豚鼠作为留用动物, 留用组豚鼠不致敏, 当氢氧化铝佐剂或流感病毒H7N9型裂解疫苗激发注射后, 若发现有过敏反应等异常症状时, 从留用组取雌雄各1只豚鼠, 自外侧跖静脉注射激发剂量的受试物, 观察是否由于药物作用引起的类似过敏反应症状, 以供结果判断时参考。采用左右后肢两点肌肉注射的方式致敏, 0.25 m L/侧, 0.5 m L/只, 各组豚鼠隔日im给予受试物, 共致敏3次。所有动物于末次致敏后第14天经外侧跖静脉注射激发给药1次, 1.0 m L/只, 观察豚鼠在激发后30 min内有无过敏反应症状并评分, 见表2, 3, 最后计算各组过敏反应发生率。 过敏反应发生率=发生过敏反应的动物数/组内动物数 1.5 点im给药方式 取40只健康ICR小鼠, 雌雄各半, 按体质量随机分为阴性对照组 (氯化钠注射液) 和流感病毒H7N9型裂解疫苗组。采用左右后肢两点im给药的方式, 0.1 m L/侧, 0.2 m L/只 (为1 200倍人用临床剂量) , 1 d内给药1次。给药后连续观察14 d动物的临床症状, 并测定小鼠体质量和摄食量, 观察期结束后, 对所有小鼠实施剖检, 对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胃、肠、气管、睾丸、附睾、子宫、卵巢、胸腺、头颈部淋巴结、肠系膜淋巴结、回肠Peyer氏淋巴集结和左、右后肢注射部位肌肉进行大体病理学检查。 1.6