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心理应激与卵巢储备功能下降的相关性研究
卵备功能是指卵内残留的卵数和质量,能够反映女性的繁殖潜力和生殖功能。卵巢储备功能下降(decreasing ovarian store,DOS)指卵巢产生卵子的能力减弱,卵泡数量、质量下降,从而导致女性生育能力减弱及性激素缺乏,表现为不孕、月经稀发、闭经等,进一步可发展为卵巢早衰(premature-ovarian failure,POF)。近年来,随着社会经济、文化、生活环境、工作节奏等的改变,女性承受着越来越大的压力,导致长期处于心理不良应激状态,DOS发病率呈逐年上升趋势,严重影响着女性的生殖健康和生活质量。现在研究表明,抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)是反映卵巢储备功能最好的指标。为此,本研究通过建立动物的应激模型,利用AMH为检测指标,对心理应激与卵巢储备功能下降的相关性作一探讨。
1 材料和方法
1.1 分组及饲养
选取刚刚性成熟的健康雌性昆明小鼠(南昌大学实验动物中心提供)40只,体质量22g左右,适应喂养3d后,按随机数字表法分为:正常对照组、应激1周组、应激2周组和应激4周组,每组10只。喂饲普通饲料,自由饮水。动物房温度控制在(24±1)℃,湿度为40%~70%,光:暗周期为12h∶12h。
1.2 离心管安装
参照文献方法,以束缚为应激原建立心理应激动物模型。如图1所示,使用50 mL离心管,在离心管管壁前端扎数个孔,保证空气通畅,在离心管盖子上钻孔,待小鼠钻入离心管后,盖上离心管盖子,将小鼠尾部暴露在外面,封闭后的离心管固定于水平桌面上。每天上午9∶00开始,下午3∶00解除。
1.3 皮质醇的测定
在应激刺激第1、2、4周结束时,于小鼠眼眶取血分离血浆,用皮质醇放射免疫分析测定盒检测样品中的皮质醇含量;分别取应激处理组和相应对照组的血液,离心制成血清标本,用ELISA法测定各组的血清AMH水平,以此检测卵巢储备功能。
1.4 血清皮质醇与血清抗苗勒管激素的相关性
应用SPSS 12.0统计软件进行方差分析,各时间点心理应激组与对照组之间比较采用成组t检验;心理应激组之间两两比较采用SNK-q检验,结果以表示;血清皮质醇与血清抗苗勒管激素变化的相关性采用Pearson相关分析。以P0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 组皮质醇水平比较
心理应激1周时小鼠皮质醇水平明显高于对照组(P0.05);心理应激2周时皮质醇水平回落至对照组水平;至心理应激4周时,皮质醇水平又有所上升,高于对照组(P0.05),虽升高幅度无心理应激1周时大,但差异有统计学意义(P0.05),见表1。
2.2 周时amh水平
心理应激1周时小鼠AMH水平明显低于对照组(P0.05);心理应激2周时AMH水平回升至对照组水平;至心理应激4周时,AMH水平有所下降,仍然低于对照组(P0.05),虽下降幅度无心理应激1周时大,但差异有统计学意义(P0.05),见表1。
2.3 血清醇与血清pmh水平的相关分析
相关分析表明:血清皮质醇的变化水平与血清AMH的变化水平呈明显的负相关关系(r=-0.990,P0.01)。
3 心理应激与卵巢功能
AMH是由二硫键连接而成的糖蛋白二聚物,属于β2转化生长超家族的成员,仅表达于性腺,雌性物种中AMH由卵巢表达。AMH可调控起始募集(卵泡从静止状态被募集进入生长池)和循环募集(生长卵泡被选择继续生长直到排卵前阶段),抑制原始卵泡池过快消耗及优势卵泡形成。I.B.Carlsson等体外培养人卵巢组织与重组鼠AMH时发现,一定浓度的AMH可抑制原始卵泡的消耗。A.L.Durlinger等通过对AMH先天缺失的小鼠和野生型小鼠在不同发育阶段(25d、4个月、13个月)的对比研究发现,AMH先天缺失小鼠较野生型小鼠含有更多窦前卵泡和小窦卵泡,且AMH先天缺失小鼠在4个月和13个月龄时,始基卵泡明显减少甚至消失,该结果表明AMH缺失可使更多始基卵泡被募集进入生长阶段,加快原始卵泡耗竭。在循环募集阶段,A.L.Durlinger等通过体外培养鼠窦前卵泡表明,AMH可通过降低卵泡对卵泡刺激素(FSH)的敏感性来抑制FSH诱导的卵泡生长,从而抑制颗粒细胞的增殖速率,减小卵泡直径。
在女性一生中,原始卵泡库内的卵泡持续分批进入募集周期,始终处于周期性生长发育与闭锁的动态变化中。女性生育潜能与卵巢内剩余的原始卵泡数量和质量相关。随着年龄增长,卵巢内存留的可募集原始卵泡数目逐渐减少,卵子质量下降,导致生育能力下降,卵巢功能逐渐衰退,称为卵巢老化。目前在临床上无法直接测量原始卵泡库存的大小,但窦卵泡数与原始卵泡池的大小相关,可通过测量窦卵泡的数目间接反映一个周期中可募集的原始卵泡情况。研究表明,AMH是由生长卵泡产生的,血清AMH水平与窦
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