酸枣仁汤化学成分的lc-q-of-ms及lc-i-ms分析.docxVIP

酸枣仁汤化学成分的lc-q-of-ms及lc-i-ms分析 酸枣仁汤是张仲景的“金棒尾血虚证、手足麻痹”1。它由枣核2-l、煎剂2-l、知母2-甘草1组成。该方具有养血安神, 清热除烦之效。主治发汗后, 不得眠睡, 或虚劳烦扰, 气奔胸中不得眠之症。现代药理学研究发现酸枣仁汤具有镇静催眠、抗抑郁、抗应激、抗焦虑［2-6］等作用, 主要用于治疗失眠、抑郁症、躁狂、神经衰弱等［7-8］神经系统类疾病。 目前对酸枣仁汤化学成分研究报道有LC-MS鉴定了27个化合物［9］和液相色谱-四级杆-飞行时间质谱 ( LC-Q-TOF-MS) 鉴定了24个化学成分［10］。 为了更深入研究酸枣仁汤的化学物质基础, 本文采用LC-Q-TOF-MS和高效液相色谱-离子阱质谱 ( LC- IT-MS) 对酸枣仁汤中化学成分进行定性分析。 1 试药及药品、试剂 1. 1仪器LC-IT-MS系统: Agilent1100型高效液相色谱仪 ( 美国Agilent公司) , 配二元梯度泵、PDA检测器、柱温箱和自动进样器; Finnigan LCQ-DECA XPPlus离子阱质谱仪 ( 美国Thermo公司) , 配电喷雾离子源及Xcalibur l. 3控制系统; LC-Q-TOF-MS系统: AcquityTMultra型高效液相色谱仪 ( 美国Waters公司) ; Triple TOF 5600+型飞行时间质谱, 配有电喷雾离子源 ( 美国AB SCIEX公司) ; Eppendorf minis- pan离心机 ( 德国Eppendorf公司) ; METTLER TO- LEDO XS105分析天平 ( 瑞士Mettler Toledo公司) ; Agilent Zorbax SB-C18Rapid色谱柱 ( 4. 6 mm × 50 mm, 1. 8 μm) , 前置Agilent C18预柱; Milli Pore超纯水器 ( 美国Millipore公司) 。 1. 2试药酸枣仁 ( 河北, 批号120425) 、茯苓 ( 安徽, 批号120504) 、川芎 ( 四川, 批号120309) 、知母 ( 河北, 批号120320) 和甘草 ( 新疆, 批号120509) 药材均购自浙江中医药大学饮片厂。各药材均由浙江大学药学院陈柳蓉副教授鉴定。对照品绿原酸 ( 批号130510) 、新绿原酸 ( 批号130426) 、隐绿原酸 ( 批号130405) 、牡荆素葡萄糖苷 ( 批号111227) 和芹糖异甘草苷 ( 批号121125) 均购自上海融禾医药科技发展有限公司, 酸枣仁苷A ( 批号MUST-) 、 酸枣仁苷B ( 批号MUST-) 、斯皮诺素 ( 批号MUST) 、 知母皂苷B-Ⅱ ( 批号MUST) 、知母皂苷A-Ⅲ ( 批号MUST 、夏佛塔苷 ( 批号MUST) 和洋川芎内酯A ( 批号MUST-) 均购自成都曼思特生物科技有限公司, 甘草查耳酮A ( 批号W07-9-4) 购自天津中新药业, 纯度均大于98% , 芹糖甘草苷、新西兰牡荆苷Ⅱ、芒柄花苷、甘草酸和甘草皂苷G2由实验室制备所得, 经1H,13C-NMR鉴定; 甲酸 ( Tedia, Fairfield, USA ) 、乙腈、甲醇为色谱级 ( Merck, Darmstadt, Germany) , LC所用水为Millipore超纯水, 其余所用试剂均为分析纯。 2 lc-ms分析 2. 1供试品溶液的制备按照金匮要略中酸枣仁汤各药材配比, 准确称取酸枣仁117. 7 g、茯苓23. 8 g、川芎23. 8 g、知母23. 7 g和甘草11. 9 g, 置2 L烧瓶中, 加入6倍量水, 浸泡12 h后用电热套加热回流1 h, 倾出第1次提取液, 纱布过滤; 药渣中加入4倍量水, 再用电热套加热回流1 h, 倾出第2次提取液, 纱布过滤, 合并2次提取液, 从中取100 m L, 蒸干, 用10 m L水溶解, 取其中1 m L以10 000 r· min－ 1转速离心10 min, 上清液经0. 22 μm滤膜过滤后供LC-MS分析。准确称取酸枣仁、茯苓、川芎、知母和甘草五味药材各10 g, 分别置于5个100 m L烧瓶中, 各加入6倍量水, 浸泡12 h后用电热套加热回流1 h, 倾出第1次提取液, 纱布过滤; 药渣中加入4倍量水, 再用电热套加热回流1 h, 倾出第2次提取液, 纱布过滤, 合并2次提取液。分别取5种药材提取液2 m L, 以10 000 r·min－ 1转速离心10 min, 上清液经0. 22 μm滤