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全保护三肽arg-glyasprgd的合成 rgd-氨基丙烯酸和天冬氨酸（arg-gly-asp，rgd）是确定细胞聚集蛋白的位置。许多含有rgd序列的多媒体传感器具有抗粘附性，能抑制肿瘤细胞与内皮细胞和基底膜之间的粘附，加速肿瘤细胞的脱附，防止肿瘤细胞留在细胞中，并抑制肿瘤细胞的转移。因此，rgd序列的合成具有重要意义。 RGD三肽分子较小,仅有少数文献描述RGD肽的合成过程.Hirano等提及了RGD的合成路线: 二环己基碳二亚胺(DCC)为偶联剂,三氟甲磺酸(TFMSA)全脱保护.该文无操作步骤,仅有元素分析及氨基酸组分分析结果. Kawasaki等在合成RGD-aPEG时,给出了其合成路线: 二肽合成用活泼酯法,三肽合成为混合酸酐法,偶联则用DCC/HOBt法.合成思路是先合成肽,再与aPEG(氨基聚乙二醇)偶联.该文有常规操作步骤,收率,Rf, [α]D,元素分析值,无波谱表征. 上述两条合成路线均是从C-端向N-端逐步合成, Hirano等的方法较为简单(因其目的仅在于合成无保护RGD), Kawasaki等将三肽合成与后续偶联全盘考虑,采用较少保护的氨基酸,是一个有借鉴意义的合成策略. 我们的合成目的是要将其它分子与三肽RGD偶联,要求其碳端COOH和氮端NH2的保护基的脱除方法迥异,保证RGD易于与其它分子连接;合成策略是先得到肽,后与其它分子偶联.因此,设计了三肽RGD的合成路线(Schemes 1, 2). 三肽Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-OBzl (TM)的合成,Scheme 1是从N-端向C-端逐个合成,Scheme 2却从C-端向N-端延伸.TM的NH2, CO2H分别以Boc, Bzl保护,使其在以HCl/EtOAc酸解脱Boc或H2/Pd(OH)2-C催化氢解去Bzl时,另一保护基均不受影响,有利于在此分子两端分别连接其它分子.本文报道RGD三肽的不同合成方法及其实验结果. 1 实验部分 1.1 edci使用ade Electrothermal IA6304型熔点测定仪(英国制造,温度未经校正);ACE-400核磁共振仪(瑞士Bruker公司, 400 MHz, 0.5% TMS为内标);H60型柱层析硅胶(青岛海洋化工厂);GF254薄层层析板(青岛海洋化工厂);2F-1型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂). Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Gly-OH(四川省农科院);EDCI (or EDC,上海丽珠东风生物技术有限公司);羰基二咪唑(CDI) (成都地奥公司友情赠送);DCC(上海化学试剂站).HOBt按文献[5a]制备,得白色晶体,收率66.6%, m.p. 156～158 ℃ (lit[5a]55%, 157 ℃),其结构经1H NMR证实.N-乙氧甲酰-2-乙氧基二氢喹啉(EEDQ)按文献[5a]制备,收率76.9%, m.p. 64～66 ℃ (lit[5a]71%, 66～67 ℃),其结构经1H NMR证实.甘氨酸苄酯对甲苯磺酸盐 (TsOH·Gly-OBzl)按文献制备,收率75.4%, m.p. 131.5～132.5 ℃(lit84%, 132～134 ℃),产品结构经1H NMR证实.N-叔丁氧羰基-β-环己基天冬氨酸苄酯[Boc-Asp(OcHex)-OBzl,3]按文献制备,收率72%, m.p. 63～65 ℃ (lit[7a]55%, 65.8～66.3 ℃).饱和HCl-EtOAc溶液、饱和HCl-EtOH溶液参照文献[5b]制备,封口后冷冻存放备用.乙酸乙酯经无水硫酸钠干燥后使用,三乙胺通氮重蒸,苄基溴减压蒸馏后使用,四氢呋喃加钠用时蒸馏,其它试剂均为市售的化学纯或分析纯产品. 1.2 arg-tos1制备 1.2.1 etoac.etoac的制备 在150 mL园底烧瓶中加入Boc-Arg(Tos)-OH, DCC和HOBt,以THF适量溶解,冰水放置.另一个100 mL园底烧瓶中加入TsOH·Gly-OBzl, DMF溶解,等摩尔Et3N中和,室温下搅拌.0.5 h后,混合反应液,搅拌反应,TLC监测反应进程.反应结束后,滤掉反应产生的DCU,减压旋蒸,得无色油状物.油状物用EtOAc溶解,饱和NaCl溶液洗涤2次,反复用EtOAc提取水层,合并EtOAc. EtOAc层用饱和NaHCO3洗3次,饱和柠檬酸洗2次,再用饱和NaCl洗至中性.无水Na2SO4干燥,过滤,旋干得白色泡状固体.硅胶柱层析,石油醚-丙酮(10∶1～1∶1,V∶V)梯度洗脱,减压旋蒸,得白色泡状固体.P2O5真空干燥,得产品1,结果见表1 (Entries 1～10).1H NMR (CDCl3)δ: 7.75 (d,J=8.0 Hz, 2