分光光度法测定甘草中总黄酮的含量.docxVIP

分光光度法测定甘草中总黄酮的含量 甘草的主要有效成分有两种。其中之一是肥皂，研究较多。其次，黄酮类主要是二羟黄酮类（甘草素）和查尔酮类（甘草素）的化合物。目前对甘草中总黄酮含量的测定方法有重量法、以芦丁为对照品的硝酸铝比色法、以柚皮苷为对照品的碱性比色法以及硼氢化钾(钠)还原比色法。因上述方法中对照品芦丁、柚皮苷均不是甘草中的成分,硼氢化钾(钠)还原比色法的稳定性差,所以上述方法都不理想。 本文用甘草苷作为对照品,利用二氢黄酮在10%氢氧化钾溶液的碱性条件下转化为查尔酮的特性,建立了一种适用于测定甘草中总黄酮含量的分析方法。 1 药品、药品与药品 HITACHI U-2001 Spectrophotometer (日本日立公司);YCQ 00超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司);Sartorius BP211D型电子天平。 甘草苷对照品为自制,经UV、IR、HNMR测试鉴定,与文献值一致,HPLC检测为单峰,归一化法计算纯度达98%以上。 本实验所用的甘草药材均由陕西中药研究所提供,并经陕西省药品检验所严智慧主任药师鉴定其品种;实验中将甘草样品用粉碎机磨碎后,未过筛,置干燥器中备用。 95%乙醇、氢氧化钾均为分析纯。 2 溶液的制备 2.1 标准储备溶液 精密称取甘草苷对照品25.71mg,置于25 mL的量瓶中,加70%乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,即得,冰箱内保存,备用。 2.2 超声提取法 精密称取甘草样品约0.2 g于50mL锥形瓶中,精密加70%乙醇10 mL,密塞,摇匀,称定质量,超声提取30 min,取出,放冷,再称定质量,用70%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 2.3 对照品的制备 精确吸取对照品储备液或样品溶液0.1 mL于10 mL量瓶中,准确加入10%氢氧化钾溶液0.5 mL,室温放置5 min,用70%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品或样品的显色溶液。 3 不同波长的样品的显色实验 取70%乙醇和10%氢氧化钾溶液分别在200-500 nm波长范围内扫描,结果表明70%乙醇和10%氢氧化钾溶液在300-500 nm范围内几乎无吸收。吸收光谱见图1。 1.70%乙醇(seventy percent of ethanol) 2.10%氢氧化钾(ten percent of potassium hydroxide) 精密移取对照品储备液0.1 mL 2份分别置于10 mL量瓶中,一份直接用70%乙醇定容;另一份按“2.3”项方法制得显色溶液,均以70%乙醇为参比溶液,分别于200-500 nm波长范围内扫描,结果如图2所示。 1.对照品溶液(the solution of reference substance) 2.对照品显色溶液(the chromogenic solution of reference substance) 由图2可见,对照品溶液加显色剂(10%氢氧化钾)后,最大吸收转移至400 nm处。 取样品溶液(陕西合阳)0.1 mL 2份于10 mL量瓶,一份直接用70%乙醇定容(以70%乙醇为参比溶液);另一份按“2.3”项方法制得样品显色溶液(以样品溶液为参比溶液),分别于200-500 nm波长范围内扫描,结果如图3所示。 1.样品溶液(the solution of sample) 2.样品显色溶液(the e chro- mogenic solution of sample) 由图3可见,样品溶液加显色剂(10%氢氧化钾)后,在405 nm处有一最大吸收。 由图2、图3可见,对照品显色溶液与样品显色溶液最大吸收波长很接近,故选择400 nm为本实验的测定波长。 4 显色溶液的确定 精密移取对照品储备液0.1 mL于10 mL量瓶,分别加不同用量(0.2,0.5,0.8,1.0,1.5,2.0 mL)的显色剂即10%氢氧化钾溶液,分别按“2.3”项方法制得显色溶液。取各显色溶液及其参比溶液在400 nm处测定吸光度,结果表明,当显色剂的用量大于0.5 mL后,吸光度值呈下降趋势,故本实验选择0.5 mL作为显色剂的用量。 5 显色溶液的制备 精密移取对照品储备液0.1 mL于10 mL量瓶,精密加入10%氢氧化钾溶液0.5 mL,室温放置不同时间(0,2,5,10,20,30,60 min)后,分别按“2.3”项方法制得显色溶液。取各显色溶液及其参比溶液于400 nm处测定其吸光度,结果表明,室温放置时间在2 min以后,吸光度值基本稳定,故本实验选择5 min作为显色时间。 6 显色溶液的测定 精密吸取对照品储备液0.02,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4 mL于10 mL量瓶中,分别按“2.3”项方法制得显色溶液。取各显色溶液及其参比溶液于400nm处测