高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中利奈唑胺的浓度.docxVIP

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中利奈唑胺的浓度 氨基溶胶是第一个应用于临床的新型溶胶药物。这种药物的作用方式独特。与其他药物没有交叉使用。药物的年龄和性别对药物的代际动力学没有显著影响。它对大多数革兰氏阳性菌都有很好的抗菌作用，包括肠球菌、杆菌和肺炎球菌。2007年9月在我国正式应用临床。目前尚无中国人群的药代动力学研究,本文通过建立LC-MS/MS法检测利奈唑胺的血药浓度,为研究利奈唑胺在中国人群中的药代动力学特点提供方法学依据。 材料和方法 1 仪器、试药和仪器 利奈唑胺注射液标准品,规格:300 mg/600 mL,批号:09D21Z31, 美国辉瑞公司提供;内标:呋喃唑酮(Furazolidone),纯度:99.9%,美国sigma-aldrich公司生产。乙腈,色谱纯,Fisher公司生产。 6410三重四级杆质谱仪,配有电喷雾电离源(ESI);1200Series高效液相色谱仪(G1322A脱气层,G1312B二元泵,G1367C自动进样器,G1316B柱温箱),以及MassHunter Workstation B.01.04(B84)数据采集和处理系统,均为美国Agilent公司产品;YKH-II混匀机,江西医疗器械厂产品;Anken TGL-16G离心机,上海安亭科学仪器厂产品;Synergy UV超纯水系统,法国MILLIPORE公司产品; XS105天平,瑞士METTLER-TOLEDO公司产品;200/1000 μL微量加样器,法国Gilson公司产品。 2 分光光度法mse 前置柱:ZORBAX EP-C18柱(2.1 mm×15 mm,3.5 μm);色谱柱:Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm);流动相:乙腈-水(50∶50);流量:0.3 mL·min-1;进样量:2 μL;柱温:35 ℃。 离子源: ESI源;检测方式:正离子模式;扫描方式:多反应监测(MRM);毛细管电压:3500 V,干燥气温度:350 ℃,离子源雾化气(N2)流量:10 L·min-1,雾化气压力:38 psi;用于定量分析的离子对分别为利奈唑胺m/z338.2 →m/z296与呋喃唑酮m/z226.1 →m/z122;扫描时间:100 ms。碎裂电压分别为140 V(利奈唑胺)和115 V(内标,呋喃唑酮);碰撞能:利奈唑胺15 eV,呋喃唑酮20 eV。 3 lc-ms/ms分析 样品从-80 ℃冰箱取出,室温下自然融化。精密吸取血浆样品100 μL及200 ng·mL-1内标储备液100 μL加入乙腈800 μL中,涡旋混匀1 min后,在1.3×10-4r·min-1下离心10 min,取上清液150 μL加入棕色样品瓶避光进行LC-MS/MS分析。 4 测定血浆样品 以利奈唑胺注射液(2 mg·mL-1)为储备液,放置于干燥避光恒温20 ℃的药品柜中保存。取空白血浆,精密吸取利奈唑胺储备液适量,制成终浓度为20,100,200,500,1000,2000,4000 ng·mL-1的系列血浆样品,-20 ℃冰箱保存待测。按“血浆样品处理方法”处理后进样测定。 结果 1 方法学评价 1.1 空白血浆中内源性物质的测定 取6名受试者给药前空白血浆,除不加内标外,按照“血浆样品处理方法”处理,得到典型谱图(图1,A),结果表明,空白血浆中的内源性物质不干扰利奈唑胺和内标呋喃唑酮的测定。取一定浓度的利奈唑胺血浆溶液加入内标,按照“血浆样品处理方法”处理,得到色谱图(图1,B)。利奈唑胺和内标呋喃唑酮的保留时间分别为1.02,1.20 min。取受试者给药后2 h血浆样品1例,加入内标,按照“血浆样品处理方法”处理,得到色谱图(图1,C)。 1.2 标准曲线的绘制 按标准曲线制备项下进样,以利奈唑胺浓度为横坐标,系列标准血浆样品测得的利奈唑胺的峰面积(AS)与内标呋喃唑酮的峰面积(AIS)比值Y为纵坐标,用加权(w=1/c2)最小二乘法进行回归运算,求得标准曲线回归方程为Y=4.92X-0.02 (γ2=0.9996);线性范围20~4000 ng·mL-1(信噪比S/N55.92)。 1.3 标准曲线及准确度 将20 ng·mL-1的利奈唑胺待测物进行6样本分析,并根据当日的标准曲线求得每一样本的浓度,求得利奈唑胺该浓度下的均值为20.37 ng·mL-1,标准差(±SD)为0.10,相对标准差(RSD)为5.2%,准确度为95%~108%。结果证明,该方法下利奈唑胺待测物浓度定量下限可达到20 ng·mL-1。 1.4 准确度和精密度 分别配制浓度为50,400,2000 ng·mL-1的血浆样品作为质控(QC)样品,按血浆样品处理方法项操作,每一浓度平行配制测定6个样本,连