鸡传染性支气管炎的诊断与防治.docxVIP

鸡传染性支气管炎的诊断与防治 鸡感染支气管炎（ib）是由感染支气管炎病毒（ibv）引起的一种急性、高度接触性鸡感染的疾病，可分为呼吸类型、肾脏类型、肠类型、腺体和胃型。1996年以来,一些地区报道了一种主要引起腺胃病变的传染性支气管炎(腺胃型IB),有些学者将该病命名为传染性腺胃炎。目前在江苏、山东、河南、河北、江苏、辽宁和黑龙江等省区均有发生本病的报道。该病在临床上以腺胃肿大出血、病鸡极度消瘦为主要特征,发病鸡群病死率可达30%～50%。目前对该病病因的研究报道较多。陕西省目前还没有腺胃型传染性支气管炎的报道,但是在实际生产中出现了很多疑似腺胃型传染性支气管炎临床症状的病例,并且造成了很大的经济损失,本试验主要通过实验室诊断来初步确定该病的病原,为今后该病的防控提供依据。 1 材料和方法 1.1 v标准毒株 疑似腺胃型临床病例来自陕西省周至县哑柏镇某肉鸡饲养场,为35日龄的艾维茵肉鸡;NDV标准毒株由西北农林科技大学禽病研究室提供;9日龄～11日龄非免疫鸡胚,购自杨凌绿方生物工程有限公司。试验用鸡来自上述曾发病鸡场提供的安卡400AA两个品种的1日龄雏鸡各10只,以及杨陵区东卜村某孵化厂提供的1日龄的尼克红雏鸡15只,共计35只。 1.2 流行病学研究 询问鸡群的规模、发病日龄、品种、病程、发病率、死亡率、发病症状、免疫情况及发病后用药情况等,并做好记录。 1.3 鸡胚尿囊腔的接种 在无菌条件下分别采集临床症状和病理变化明显的病鸡的脑组织和腺胃,加少量的灭菌生理盐水研磨,制成1∶5的悬液反复冻融3次,按1 000 U/mL的比例加入青霉素和链霉素,置冰箱4℃过夜,以3 000 r/min离心15 min,取上清液,用0.45μm微孔滤膜过滤后,接种于10日龄的鸡胚尿囊腔,每只鸡胚接种0.2 mL,每份病料接种5枚胚。接种后每12 h照蛋1次,24 h死亡的鸡胚弃去,取24 h～72 h死亡的鸡胚置于4℃冰箱18 h～24 h,无菌操作收集尿囊液,观察鸡胚病变,测定尿囊液HA价,并通过10日龄鸡胚继续传代。 1.4 病毒的识别 1.4.1 病毒粒径和大小的测定 取接种分离病毒株的鸡胚尿囊液,用0.45μm微孔滤膜过滤,以10 000 r/min离心30 min,取上清液用铜网制膜吸附,2%的磷钨酸负染10 min,置7.2万倍透射电镜下观察病毒粒子形态和大小。 1.4.2 血凝性观察 用微量血凝试验法测定分离毒的尿囊液,观察有无血凝性。如无血凝性将分离毒的尿囊液用胰酶处理在37℃温箱中消化3 h,然后再进行血凝试验,观察结果。 1.4.3 接种培养监狱警察 取分离毒作1∶100稀释接种非免疫鸡胚5枚,每胚0.2 mL;另外取5枚胚接种灭菌生理盐水,作为对照组。培养12 h后再接种新城疫病毒0.2 mL/胚,孵育72 h,每隔24 h照蛋1次,取死胚置4℃冰箱,72 h后全部取出置4℃冰箱内,收取尿囊液,测定HA价。 1.4.4 试验鸡感染情况观察 取分离毒经点眼、滴鼻和肌肉注射等途径人工感染1日龄的雏鸡,分别接种安卡400AA肉鸡各5只,尼克红蛋鸡10只,感染剂量均为0.2 mL,每个品种各取5只鸡作为空白对照。感染后隔离饲养,每天记录发病和死亡情况。对死亡的鸡进行剖检,观察病变,并进行病毒回收试验。 2 结果 2.1 发病鸡及感染 该鸡场共有3 600羽艾维茵肉鸡,24日龄后开始发病,28日龄开始死亡,35日龄死亡达到高峰;鸡群发病率50%,死亡率可达20%;发病鸡有呼吸道症状,整体饮水量增大,采食量减少;鸡群用新城疫Ⅳ系疫苗免疫过,没有用过其他疫苗,其病变主要表现为腺胃乳头出血、肿胀,肺脏和气管出血,以及肾脏肿大出血;病鸡送来前已经用药治疗7 d,前5 d用乌洛托品和肾安(主要成分为茯苓、泽泻、肉桂、白术),均无疗效。 2.2 羊膜增重,绒囊出血,鸡胚出血 病料接种鸡胚后,48 h有3枚鸡胚死亡,可见尿囊液增多、浑浊;72 h死亡4枚,除了可见尿囊液增多外,还可见羊膜增厚,绒毛囊出血,鸡胚出血;96 h鸡胚全部取出,可见鸡胚全身充血出血,尤其是头两侧和大腿两侧可见大量的出血点,尿囊液大量增多有的可达18 mL～20 mL,羊膜增厚,胚体卷缩。 2.3 病毒鉴定结果 2.3.1 冠状病毒结构 在电镜下可见病毒粒子呈圆形或椭圆形,大小为80 nm～130 nm,有囊膜,核衣壳结构清晰,外包有许多杵状的纤突,有的病毒粒子纤突丢失而看不到,是典型的冠状病毒结构。 2.3.2 不同的胰酶液凝试验 对分离病毒株进行直接血凝试验,结果表明这些毒株没有直接血凝性,用10 g/L的胰酶处理,再进行血凝试验,结果有血凝性,且血凝价也较高,平均滴度达到8 log2以上(表)。 2.3.3 血凝效价要比接种盐水再接种新城疫病毒的血凝效价要比接种