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干细胞的功能及应用 肝移植是治疗末期肝疾病最有效的方法。然而，肝移植需求之间的巨大差异促使人们寻求其他替代疗法。近来, 干细胞治疗终末期肝病越来越受到关注, 特别是骨髓来源的干细胞[主要含造血干细胞 (HSC) 和间质干细胞 (MSC) ]治疗已有体外和动物实验支持, 自体回输骨髓干细胞治疗亦有相关临床报道。此外, 其他来源的MSC治疗肝病亦取得了较好进展。本文就此方面的研究进展综述如下。 1 骨髓治疗肝癌的相关随用细胞 干细胞根据其发育阶段可分为胚胎干细胞 (ES) 和成体干细胞, 其重要特征是具有无限自我更新能力, 可以分化成特定组织, 在细胞发育过程中处于较原始阶段。骨髓是成体干细胞的重要来源, 主要含HSC和MSC。MSC在骨髓中含量最多, 在其他组织器官如脐带组织、脐带血、胎盘、外周血、脂肪组织中的含量也较丰富。基于干细胞强大的分化潜能, 人们开始尝试应用干细胞治疗各种疾病。自1999年Petersen等发现骨髓中某些干细胞具有向肝细胞分化的潜能以来, 人们开始研究应用干细胞治疗肝病的可行性, 后来发现不同来源的干细胞如骨髓HSC、骨髓MSC等均可定向诱导分化为肝细胞样细胞, 具有正常肝细胞功能, 如分泌尿素和白蛋白等, 且得到动物实验的验证, 临床亦有自体回输骨髓干细胞治疗肝病的报道。目前开展的肝病治疗研究的干细胞类型如图1所示。 HSC.Hematopoietic stem cell;i PS.Induced pluripotent stem cell; 2 临床前研究 2.1 cd133+细胞移植 以前认为只有具备HSC特性的细胞才能转化为肝细胞, 1999年Petersen等发现骨髓干细胞或HSC能够在鼠肝内转化为肝卵圆细胞甚至成熟的肝细胞和胆管细胞。2 0 0 0年T h e i s e等在异性间骨髓移植或肝移植的受体中也发现了源于供体的肝细胞和胆管细胞。Lagasse等用正常小鼠骨髓细胞移植治疗延胡索酰乙酰乙酸盐水解酶缺乏 (FAH-/-) 导致的遗传性Ⅰ型酪氨酸血症小鼠, 发现骨髓中只有HSC能在体内转分化为肝细胞, 并在受体内形成供体源造血和肝细胞再生, 受体小鼠血液生化指标明显改善。之后, 人们尝试应用粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 直接动员骨髓释放干细胞来治疗肝病。动物部分肝切除后应用G-CSF可以促进肝再生, 其机制可能与血液中CD133+或CD34+细胞动员有关, 且体外培养G-CSF动员后CD133+细胞可表达肝细胞特异性标志物。为进一步验证CD133+细胞对肝再生的促进作用, am Esch等将分选出的自体骨髓CD133+细胞回输至选择性门静脉栓塞的中央巨型肝脏肿瘤患者中, 发现CD133+细胞移植组非栓塞部分肝脏体积明显增大, 有利于患者接受进一步手术。 Sakaida等应用四氯化碳 (CCl4) 建立的小鼠肝纤维化模型进行研究发现, 异体骨髓细胞移植能减轻肝纤维化程度, 提高小鼠生存率。大鼠未受损的肝血窦内皮细胞上有HSC表面标志 (CD45+和CD33+) 及内皮细胞的表面标志 (CD31+) , 肝血窦内皮细胞受损后, 回输骨髓来源的CD133+干细胞, 在受体肝脏中可发现供体来源的肝血窦内皮细胞, 替代了原来的受损细胞。 也有部分学者对HSC向肝细胞分化的潜能及治疗意义提出了质疑, 他们应用动物的骨髓造血祖细胞在体外并不能诱导成功能性的肝细胞, 应用转基因的HSC研究发现, 在体内只有极少部分HSC来源的肝细胞与受体的肝细胞形成融合细胞, 几乎没有任何治疗意义。 2.2 药代动力学研究 由于骨髓细胞成分复杂, 何种细胞更适合用于肝细胞再生治疗尚不清楚, 但越来越多的研究倾向于骨髓MSC。Sato等比较了人骨髓中的MSC、CD34+、非MSC/CD34–等3种细胞直接注射到大鼠肝内后转分化成肝细胞的能力, 结果骨髓MSC显示出最强的向肝细胞分化的潜能。 在适当条件尤其是肝脏损伤的情况下, 骨髓MSC可以分化为肝细胞样细胞, 这些分化细胞表现出成熟肝细胞的形态和特征, 如表达肝细胞特异性基因, 具有合成和分泌白蛋白、储存糖原、代谢尿素及解毒功能等。Kuo等应用人骨髓来源的MSC进行移植治疗, 使小鼠暴发型肝衰竭得到有效恢复, 并促进了肝脏的再生。脂肪组织来源的MSC与骨髓来源的MSC相似, 在体外可诱导成肝细胞样细胞, 将这些肝细胞样细胞移植到CCl4肝损伤模型的小鼠体内, 可整合入宿主的肝脏中, 使其肝脏功能得到改善。Van Poll等应用D-半乳糖胺建立小鼠急性肝损伤模型, 再输入MSC条件培养基 (MSC-CM) , 结果有效地减少了肝细胞坏死, 促进了肝细胞增殖, 并抑制了肝损伤标志物的释放。Chamberlain等将人MSC分别通过腹腔和肝内注射至胎羊中, 发现经肝内