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6-ba混合诱导红双喜月亮快繁技术研究 红双喜是玫瑰混合香料的玫瑰。它的花很大，优雅而美丽，从白色到红色，总是随着时间的推移而改变。花朵美丽、热情、花香浓郁，适应性强，抗旱抗旱性强。这是玫瑰品种之一。但该品种常规繁殖方式扦插繁殖系数低、成本高, 生长周期长, 而且容易造成病毒的危害, 降低品质, 在红双喜组培方式快繁方面, 初步在李启任的红双喜腋芽诱导和高彩云的不定芽继代增殖中得到了体现, 但是关于该植株整个再生体系的建立 (包括消毒方式、腋芽的诱导、增殖、生根等) 还未见报道。本项研究针对月季组培过程中的消毒方式、腋芽诱导、增殖、生根等关键环节, 对培养基的种类、生长调节剂的浓度及比例进行研究, 以期找到其组培快繁的最佳培养条件, 为月季工厂化育苗提供技术支持。 1 材料和方法 1.1 腋芽诱导培养基 以月季品种红双喜中部茎段为试材。试材于2006年8月6日采自郑州市月季园。 腋芽诱导培养基见表2, 增殖培养基见表3, 生根培养基见表4。所有培养基均附加30mg/L蔗糖, 5.2mg/L琼脂, pH5.8。 1.2 方法 1.2.1 腋芽诱导 1 不同的处理对生活质量的影响 采取健壮的、带有腋芽的中部茎段为外植体, 去除叶片和茎刺, 流水冲洗2h, 然后分别做以下5种处理。处理1, 流水冲洗1h, 75%酒精1min, 0.1%HgCl28min;处理2～处理5均先用流水冲洗1h, 软毛刷刷洗表面1遍, 0.625g/L青霉素和1.0g/L多菌灵混合液浸泡10min, 然后再做以下处理。处理2, 75%酒精1min, 6%NaClO 8min。处理3, 75%酒精1min, 0.1%HgCl26min。处理4, 75%酒精1min, 0.1%HgCl28min。处理5, 75%酒精1min, 0.1%HgCl210min。 将消毒处理后的茎段接入腋芽诱导培养基 (表2) 中, 每瓶接3个外植体, 接种后20d观察茎节的污染率、褐化死亡率、成活率等情况, 比较不同表面灭菌方式的灭菌效果, 筛选最适外植体处理方式。 2 不同激素配比对腋芽诱导率的影响 将经过上述最佳消毒方式消毒后的外植体接种于含有6-BA浓度分别为0mg/L, 0.5mg/L, 1.0mg/L, 1.5mg/L, 2.0mg/L, 3.0mg/L的腋芽诱导培养基上, 20d后统计各个品种腋芽的诱导率及芽生长状态, 比较不同激素配比对腋芽萌发生长的影响。各做3个重复, 每个重复20个外植体。 1.2.2 重复3.4g/lnaa,ms 将长至3 cm左右的丛生芽转入6-BA与NAA不同浓度配比的MS芽增殖培养基 (表3) 上, 共8个组合, 分别为MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA, MS+1.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA, MS+1.5mg/L 6-BA+0.01mg/L NAA, MS+1.5mg/L 6-BA, MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA, MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA, MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/L NAA, MS。每个品种3个重复, 每个重复24个外植体。每4周继代1次, 统计试管苗的增殖率、苗高及生长情况, 比较不同激素配比对芽增殖生长的影响。 1.2.3 无机盐浓度、不同iba浓度对根系生长的影响 将获得生长良好的丛状苗切割成单芽, 接种于不同浓度的MS与IBA的生根培养基中 (表4) 培养, 共9个组合, 分别为1/2 MS, 1/2 MS+0.01mg/L IBA, 1/2MS+0.1mg/L IBA, 1/2MS+0.2mg/L IBA, 1/2MS+0.5mg/L IBA, MS, MS+0.01mg/L IBA, MS+0.2mg/L IBA, MS+0.5mg/L IBA。25d后观察生根情况 (诱根率、根数、根长及有无侧根) , 比较不同无机盐浓度、不同IBA浓度对其生根生长的影响。光下培养于25℃, 光照强度为2000lx, 光照时间12h/d的条件下进行。 2 结果与分析 2.1 腋芽诱导 2.1.1 不同消毒效果,茎段污染率高,成活率低 由表1看出, 不同消毒方式的灭菌效果存在显著差异。处理4的消毒效果 (图示a) 最好, 其茎段成活率可达86.67%。处理2的消毒效果较差, 其茎段污染率较高 (图示b) 。而处理1的消毒效果最差, 其茎段污染率可达71.05%, 成活率仅为26.32%。由此可见, 无菌消毒前对茎节用毛刷刷洗和用合适浓度的青霉素和多菌灵混合液处理对消除污染至关重要;而合适浓度的HgCl2对消除污染, 促进茎节腋芽的诱导分化、生长更为有利。 2.1.2 不同浓度6-ba对乳状芽萌发的影响 从表2看出, 在未加6