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复合因素制备大鼠酒精性肝纤维化模型

酒精性肝病（ald）是继病毒性肝炎之后的第二种肝疾病，也是发达国家年轻人死亡的主要原因。据统计,嗜酒者中约2/3可发展为ALD,10%～20%转变为肝硬化。随着我国酒精消费量的逐年增加,由此引发的ALD也呈上升趋势。近年来,有关ALD发病机制及其药物治疗方面的研究日益受到学者的重视,建立稳定的ALD模型,特别是酒精性肝纤维化模型已成为深入开展这项研究的关键所在。

1材料和方法

1.1实验动物

雄性Wistar大鼠,SPF级,体质量(150±20)g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。

1.2fluca公司

60°红星二锅头,购自北京酿酒总厂;CCl4、橄榄油和多聚甲醛,购自国药集团化学试剂有限公司;吡唑购自瑞典Fluca公司;丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)和γ谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyltransferase,γ-GT)检测试剂盒,购自南京建成生物公司。

1.3酒精性肝纤维化模型大鼠肝脏病理组织病理学检测

Wistar大鼠51只,适应性饲养1周后随机分为3组:(1)空白对照组,12只;(2)微量CCl4处理组,12只;(3)酒精性肝纤维化模型组,27只。酒精性肝纤维化模型组大鼠予以二锅头酒(10ml·kg-1·d-1)、玉米油(2ml·kg-1·d-1)、吡唑(25mg·kg-1·d-1)混合物灌胃,2次/d,早晚各1次。第2周起按0.3ml·kg-1·d-1剂量予以腹腔注射微量CCl4橄榄油溶液(CCl4∶橄榄油=1∶3),2次/周。空白对照组和微量CCl4处理组均予以等量生理盐水灌胃。微量CCl4处理组另予以CCl4腹腔注射,剂量同酒精性肝纤维化模型组;空白对照组予以等量生理盐水腹腔注射。造模第2、4、6、8、10周各取3只酒精性肝纤维化模型组大鼠,观察肝脏组织病理学变化。其余大鼠于造模第12周用盐酸氯胺酮麻醉(2ml/kg)后,腹主动脉采血,从肝右叶中部切取肝组织,用4%甲醛固定后制备石蜡切片待检。

1.4大鼠血生化指标、肝组织病理学及病理组织学检测

(1)动物一般情况,包括精神状态、活动情况、皮毛光泽度、食量、大小便等;(2)肝脏形态学观察,包括肝脏质量、外形、色泽、质地等;(3)血生化指标的测定,包括血清ALT、AST、γ-GT,采用UV-2102C紫外/可见分光光度计,按试剂盒说明书进行检测;(4)光镜下肝脏组织病理学观察,HE染色观察各大鼠肝脏病理组织学改变,包括肝细胞脂肪变性、坏死及炎细胞浸润等;Masson三色染色法观察大鼠肝脏胶原组织沉积的变化。病理分级标准参照王泰龄法。

1.5统计学处理

所有数据均采用SPSS11.5软件进行统计学处理,计量资料均数用xˉ±sxˉ±s表示,进行双侧t检验;病理分级比较采用秩和检验。检验水准α=0.05。

2结果

2.1大鼠的一般情况

空白对照组和微量CCl4处理组大鼠毛发光泽,体重增加,体态活泼,食量及大便正常,无嗜睡现象。酒精性肝纤维化模型组大鼠每日于灌酒后即出现暂时性兴奋,但很快进入醉酒状态并开始酣睡,饮食逐渐减少,体重下降,大便干燥或不成形,皮毛疏松无光泽,精神不振。酒精性肝纤维化模型组有4只大鼠在实验期间死亡。

2.2质、色。请分为2.

空白对照组和微量CCl4处理组大鼠肝脏包膜光滑,肝脏呈红褐色,质地中等。酒精性肝纤维化模型组大鼠肝脏色泽较正常肝脏暗淡,质地偏硬,有瘀点,部分表面呈轻度桔皮样变,肝脏相对质量(肝脏质量/大鼠体质量×100%)大于正常对照组,见表1。

2.3各组大鼠血清生化指标的比较

酒精性肝纤维化模型组与正常对照组、微量CCl4处理组相比,血清ALT、AST、γ-GT水平明显升高,差异有统计学意义。见表1。

2.4各组大鼠肝组织病理学改变

酒精性肝纤维化模型组大鼠造模第2、4周,大鼠肝小叶结构清晰,肝细胞索排列整齐、呈放射状,肝窦正常,胞核结构清晰;造模第6周,肝组织表现为轻度脂肪变性,汇管区少量炎细胞浸润,窦周细小纤维化;造模第8周,肝细胞脂肪变性、肿大,胞浆疏松,肝细胞内出现大脂滴,核被挤向边缘,少量肝细胞内可见小脂滴,同时伴有炎性细胞浸润,汇管区和窦周纤维沉积增加;造模第10周,病理改变与第8周基本相似,但肝细胞脂肪变性加重,炎性细胞浸润程度加重,汇管区和窦周纤维沉积明显增加;造模第12周,肝细胞脂肪变性消失,炎性细胞浸润进一步加重,可见桥接坏死,Masson染色示肝细胞周围纤维沉积增加,中央静脉周围、汇管区胶原纤维向小叶内延伸。空白对照组大鼠肝组织HE染色示肝小叶结构清晰,肝细胞索排列整齐、呈放射状,肝窦正常,胞核结