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烟草漂浮育苗期病毒传播方式的研究

浮育苗技术在香烟生产中的成功应用，规范了香烟苗工作，提高了烟草苗科技含量，为优质烟草植物的生产奠定了良好的基础。随着烟草漂浮育苗技术的推广应用,烤烟苗期病害种类已由传统的真菌、细菌病害为主逐渐转变为以病毒病为主。烟草病毒性病害是世界各烟区烟草上的主要病害之一,发生普遍而严重,每年都要造成较大的损失。病毒病发生后,烤烟的各项经济性状指标都明显下降。有研究表明大田期病毒病可导致烟叶产量减少22.3%,产值只有健康烟产值的60.2%。而苗期就被TMV感染,则可能引起100%烟叶损失的毁灭性后果。由于对漂浮育苗中病毒病的发生流行规律缺少研究,再加上管理和消毒不善,病毒病如烟草普通花叶病毒病在一些地区的育苗棚里流行,已严重威胁到后期的烤烟大田生产,成为烤烟飘浮育苗的主要风险。剪叶是漂浮育苗中不可缺少的环节,通过剪叶可以调节烟苗生长,使烟苗均匀一致,增加茎粗,促进根系生长发育,提高移栽苗的数量和移栽成活率,还可避免漂浮苗的生长失控,减少移栽苗的叶面积,限制真菌病害,减少发生早花的可能性。

本文以漂浮育苗中普遍发生的烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)为研究对象,就烤烟漂浮育苗中病毒病的传播途径和剪叶过程中TMV的传播效率等进行研究,观测TMV通过剪叶途径传播病害的情况,以指导生产。现将结果报道如下。

1材料和方法

1.1材料表面

1.1.1培育健康试验用烟苗

按照烤烟漂浮育苗技术方法,在云南农业大学试验基地培育健康试验用烟苗,品种为大理烟草公司提供的云烟85包衣种。试验时将162穴漂盘连同烟苗重新分割成小盘供各试验处理用。

1.1.2mtv毒源

经电子显微镜检测为TMV发病烟株,纱网隔离盆栽作为试验用TMV毒源,接种时选择有明显花叶发病症状的叶片。

1.1.3缓冲液的配制

取TMV接种发病明显的嫩叶,用0.005mol/L磷酸缓冲液(配方:磷氢二钾7.6g,磷酸二氢钾2.25g,亚硫酸钠1.26g,定容1000mL,pH7.5)制成100倍带毒液,供试验用。

1.1.4切割工具

普通剪刀(剪刀用前和各处理之间采用16%二氧化氯800倍液浸泡消毒5min,清水冲洗备用)。

1.2方法

1.2.1剪叶剪叶

处理1:剪刀蘸取病毒液后剪叶。用剪刀蘸取TMV接种液,使剪刀带毒,再用于剪叶。

处理2:剪刀先剪病叶再剪叶。先剪TMV病叶3次,再用于剪叶。

常规对照:消毒剪刀直接剪健康烟苗。

1.2.2切割方法

每株烟苗统一剪3片叶。

1.2.3培养独立培养组

用每盘35株6～7叶期的健康烟苗,经过处理剪叶后独立培养,每处理设3次重复。剪叶后的烟苗做好标记,各盘用塑料盆隔离培养,中间做好防虫等管理工作。

1.3结果的检查和计算方法

1.3.1mtv发病率研究

以出现典型花叶症状为标准,观察记录发病株位置和发病株数。

1.3.2发病率计算的公式为

发病率%=发病总株数调查总株数×100%=发病总株数调查总株数×100

2结果与分析

2.1剪刀再剪病叶感染tmv

从每小区35株3次重复平均值发病情况(表1)可以得出:处理1中,剪刀先蘸取病毒液再剪叶,发病率最高,为57.1%;处理2中剪刀先剪病叶再剪叶,发病率为50.5%;对照未发病。数据比较表明,剪刀蘸取病毒液后再剪叶和剪刀先剪病叶再剪叶均能有效传播TMV,且发病严重,发病率在45%～60%左右,表明污染了TMV的剪刀很容易将病毒传染给健康烟苗。由于蘸取TMV病毒液后的剪刀的剪叶发病率高于剪病叶的处理6.6个百分点,证明剪刀污染病毒量越多,发病率越高。

2.2发病株发病率

剪刀蘸取病毒液后剪叶和剪刀先剪病叶再剪叶的不同处理中,前10株发病率分别为90%,87%,第2个10株发病率分别为70%,70%,第3个10株发病分别为33%,23%,最后5株发病率仅为3.3%和1.7%(表1)。表明TMV在污染剪刀上的传播效率随剪苗数量的增加而下降,开始剪的10株发病率在90%左右,第2个10株在70%左右,第3个10株在20%～30%左右,连续剪苗30株之后发病率明显降低,仅在3%左右,两种不同处理中,连续剪叶的前30株累计发病率占总发病率96.7%和98.0%(图1)。

3预防剪刀剪苗数量

TMV需靠一定浓度才能成功侵染烟株活体细胞引致烟株发病的。不同的带毒浓度剪刀剪叶,发病率不同,即便带毒浓度相同的剪刀,也受剪叶过程和病毒侵入机会影响,发病率也不一定相同。但从试验结果可以分析得出,随着带毒剪刀剪苗数量增加,剪刀上的病毒被逐渐稀释和损