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ak三种亚型表达在寻常性银屑病发病中的意义

有机质的形成和细胞的过度生长是癫痫的重要病理特征之一。大量研究表明,磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3kinase,P13K)信号转导通路在细胞生长、增殖等功能中起重要作用。Akt是PI3K信号通路下游的关键分子。Akt又名蛋白激酶B(PKB),是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是病毒癌基因V-akt同源物,因此命名为Akt。Akt家族包括Akt1,Akt2,Akt3三个亚类,它们的结构相似但功能不完全相同。以往的研究表明,银屑病皮损内Akt的活性增强,提示其有可能与银屑病角质形成细胞的增殖过速有关,但是何种亚型参与了银屑病皮损内Akt酶活性的增强目前尚不明确。本研究通过免疫组化法对寻常性银屑病患者皮损和正常皮肤内Akt三种亚型进行检测,以进一步探讨Akt亚型在银屑病发病中的作用。

1材料和方法

1.1材料和病例研究,为本研究对象

收集30例中日友好医院皮肤科门诊就诊的寻常性银屑病患者,男女各15例。入选标准:①年龄18～60岁;②经临床和组织病理确诊;③为寻常性银屑病斑块型进行期患者,病情严重程度为中度;④无系统疾病史;⑤取材前3个月内无系统治疗史,2周内无外用药应用史。另取15例健康人皮肤作对照组,为本院整形外科手术切除的正常皮肤。两组年龄、性别等均具有可比性(P0.05)。手术取材,标本经福尔马林固定、石蜡包埋。石蜡切片厚4～5μm,用于免疫组化研究。本研究经院伦理委员会批准,且患者知情同意。

1.2抗体和akt3

Akt1(兔抗人单克隆抗体),Akt2(鼠抗人单克隆抗体)和Akt3(鼠抗人单克隆抗体)分别购自美国Epitomics,SantaCrus,Novus公司。SP-9000免疫组化试剂盒购自美国Zymed公司。

1.3染色、质控

常规石蜡切片,采用免疫组化SP法,操作步骤按说明书进行,所有切片染色均在同一质控条件下进行。PBS代替一抗做阴性对照,阳性对照为乳腺癌和肺癌组织。

1.4半定量分析

Akt1,Akt2和Akt3阳性表达均可定位于细胞浆和细胞核,为棕黄色颗粒。采用日本NIKON公司的ECLIPSE80i图像采集与分析系统对染色切片进行半定量分析。在相同条件下对同一批染色切片进行图像采集,每张切片随机选取5个高倍镜视野(×400),通过NIS-Element软件对采集图像进行平均光密度测定。以每例5个视野的平均光密度值作为该例的测量值。

1.5统计处理

用SPSS17.0软件,计量资料以xˉ±sxˉ±s表示,采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1组织病理学检测

正常皮肤中,Akt1主要表达于表皮基底层角质形成细胞的胞浆内,呈阳性染色,基底层上角质形成细胞的表达为弱阳性;真皮血管内皮细胞胞核、胞浆均表达弱阳性,淋巴细胞个别胞浆表达呈弱阳性或阳性,毛囊、皮脂腺、汗腺细胞表达阳性(图1)。银屑病皮损中,Akt1在表皮全层均有表达,但表达较弱,阳性细胞主要表现为细胞浆着色,真皮血管内皮细胞、淋巴细胞、附属器的表达与正常皮肤无明显差别(图2)。银屑病皮损表皮中Akt1的平均光密度值与正常表皮相比,差异无统计学意义(P0.05),图像分析结果见表1。

2.2细胞胞浆染色

正常皮肤表皮中,Akt2主要表达于基底层角质形成细胞的胞浆内,基底层上角质形成细胞的表达为弱阳性;真皮血管内皮细胞胞浆染色呈弱阳性,个别淋巴细胞胞核表达弱阳性,毛囊、皮脂腺、汗腺细胞的表达均呈阳性(图3)。银屑病皮损中,Akt2在表皮全层细胞胞浆内均有较弱表达,真皮血管内皮细胞、淋巴细胞、附属器的表达与正常皮肤无明显差别(图4)。银屑病皮损表皮中,Akt2的平均光密度值与正常表皮相比,差异无统计学意义(P0.05),图像分析结果见表1。

2.3胞浆、胞核和正常皮肤的表达

正常皮肤中,Akt3在表皮全层均有表达,基底层表达最强,以胞浆染色为主,基底层上角质形成细胞的胞浆染色呈弱阳性,少部分胞核呈阳性,部分真皮血管内皮细胞表达呈弱阳性,个别淋巴细胞表达弱阳性,毛囊、皮脂腺、汗腺的表达呈阳性(图5)。银屑病皮损中,Akt3在表皮全层细胞的胞浆、胞核均有着色,但以胞核为主,真皮血管内皮细胞、淋巴细胞、附属器的表达与正常皮肤无明显区别(图6)。银屑病皮损表皮中Akt3的平均光密度值高于正常表皮,差异有统计学意义(P0.01),图像分析结果见表1。

3磷酸化相关蛋白表达及活性

研究表明,Akt1主要分布于大脑、胸腺和肺,在卵巢、乳腺和胰腺肿瘤中发现Akt2基因扩增,而Akt3主要分布于大脑、心脏和肾脏。它们在皮肤组织中的表达与分布情况不明。目前认为,Akt1,Akt2和Akt3在细胞生长及代谢等功能中发挥不同的作用。Akt1可能参与调控细胞生长和生