缺氧通过抑制PTPN2破坏慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻上皮屏障的机制研究.pdf

摘要

摘要

目的：

缺氧参与了炎症和免疫反应，然而其在慢性鼻窦炎伴鼻息肉(Chronic

rhinosinusitiswithnasalpolyps,CRSwNP)发病机制中的作用尚不完全清楚。本研

究旨在探讨缺氧破坏CRSwNP鼻上皮屏障的机制。

方法：

1、采用免疫组化染色、蛋白免疫印迹实验及qRT-PCR检测对照组中鼻甲

或钩突组织，以及嗜酸性粒细胞型CRSwNP(EosinophilicCRSwNP,Eos

CRSwNP)组和non-EosCRSwNP组患者鼻息肉组织中缺氧诱导因子-1α

(Hypoxia-induciblefactor-1α,HIF-1α)、非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2(Protein

tyrosinephosphatasenon-receptortype2,PTPN2)及紧密连接(Tightjunctions,TJs)

成分claudin-4、occludin及ZO-1的表达。

2、原代人鼻上皮细胞(Primaryhumannasalepithelialcells,HNECs)经氯化钴

(Cobaltchloride,CoCl2,HIF-1α稳定剂和缺氧模拟剂)处理来模拟细胞缺氧，并

使用HIF-1α抑制剂PX-478处理后，通过蛋白免疫印迹实验及qRT-PCR检测

HIF-1α、PTPN2及TJs的表达，通过免疫荧光染色来检测TJs的表达，并使用

异硫氰酸荧光素葡聚糖4kDa(Fluoresceinisothiocyanatedextran4kDa,FD4)评估

细胞旁通量。在BEAS-2B细胞中用siRNA敲低PTPN2或慢病毒感染过表达

PTPN2，并使用CoCl2处理后通过蛋白免疫印迹实验及qRT-PCR检测PTPN2

及TJs的表达。

3、使用卵清蛋白和金黄色葡萄球菌肠毒素B建立EosCRSwNP小鼠模型，

并应用PX-478和过表达PTPN2慢病毒干预，通过FD4来评估鼻黏膜上皮通透

性，通过苏木素伊红染色观察小鼠鼻黏膜息肉样病变，并使用免疫组化染色来

检测鼻黏膜HIF-1α、PTPN2及TJs的表达。

结果：

1、non-EosCRSwNP组和EosCRSwNP组中HIF-1α的蛋白水平均高于对

照组。此外，EosCRSwNP组中HIF-1α的蛋白水平高于non-EosCRSwNP组。

non-EosCRSwNP组和EosCRSwNP组中PTPN2、claudin-4、occludin及ZO-1

II

摘要

的蛋白水平均低于对照组。此外，EosCRSwNP组中PTPN2及TJs的蛋白水平

均低于非EosCRSwNP组。non-EosCRSwNP组和EosCRSwNP组中的PTPN2

及TJs的mRNA水平均低于对照组。

2、使用缺氧模拟剂CoCl2处理后降低了HNECs中PTPN2及TJs的mRNA

和蛋白表达水平，并增加了上皮细胞的细胞旁通量，该作用可被PX-478抑制。

免疫荧光观察到CoCl2处理后细胞间TJs的正常完整结构被破坏，而PX-478在

一定程度上恢复了细胞间TJs的完整结构及细胞形态。在BEAS-2B细胞中，过

表达PTPN2后抑制了CoCl2诱导的TJs表达下调，而敲低PTPN2后则加重了

CoCl2的这一作用。

3、在EosCRSwNP小鼠模型中，PX-478和过表达PTPN2的干预均减少

了小鼠鼻息肉样病变的形成、恢复TJs的表达和降低鼻黏膜上皮的通透性。

结论：