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摘要

豆粕源抗氧化肽对急性酒精性肝损伤的预防作用及机制研究

本研究隶属于吉林省教育厅科学技术研究项目(JJKJ)。近年来，

随着酒精消费水平的持续增加，我国的酒精性肝病发病率亦呈逐年上升趋势，已

严重危害到国人的生命与健康。利用食源性抗氧化活性物质干预调节由酒精摄入

引起的机体氧化应激状态，是缓解和改善酒精性肝损伤的重要途径。豆粕中富含

大豆优质蛋白，经水解获得的豆粕源抗氧化肽(Soybeanmeal-derivedantioxidant

peptides,SAPs)具有预防酒精性肝损伤的潜力，但目前并未见相关研究报道。本

文以SAPs为研究对象，首先通过单因素和响应面实验优化了超声辅助酶解制备

工艺参数，然后利用超滤技术进行分离纯化，同时筛选出抗氧化活性最优的组分

进行序列鉴定，并对鉴定所得肽进行抗氧化活性表征。最后通过构建小鼠模型，

从氧化应激、脂质代谢及炎症因子的角度探究了SAPs对急性酒精性肝损伤的预

防作用效果，并借助转录组学技术阐明其预防作用机制。本研究能够提高大豆产

业附加值，并对开发安全有效的食源性保肝护肝功能肽产品具有重要意义。全文

的主要研究内容及结果如下：

（1）以豆粕为原料，进行了SAPs的制备、分离纯化、序列鉴定及抗氧化活

性表征的研究。结果表明：采用超声辅助酶解法制备SAPs的最佳工艺条件为酶

解pH8、底物浓度9%、加酶量6665.39U/g、温度50℃、酶解时间4h、超声时

间9min、超声功率300W。分离纯化后得到分子量1kDa的组分(SAPs5)抗

氧化活性最优。将SAPs5组分进行序列鉴定，共得到10条肽序列，分别是YLFKD、

IWNLN、GTYW、CLA、KVW、LRC、SLW、VYV、WLQ和YYK。通过固相

合成上述肽，然后进行抗氧化活性表征，得到4肽序列GTYW活性最佳，这可

能与肽链中存在的酪氨酸和色氨酸密切相关。

（2）将实验小鼠分成空白组(CK)、模型组(M)、对照组(GSH)和SAPs

组（SAPs5和GTYW），通过预先给予ICR小鼠SAPs（SAPs5和GTYW）干预，

然后构建急性酒精性肝损伤模型，从氧化应激、脂质代谢及炎症因子的角度探究

其预防作用效果。结果表明：与M组相比，SAPs组的血清AST/ALT、TC和TG

含量，以及肝脏CYP2E1、IL-6、IL-1β与TNF-α含量均有显著性降低(p0.05)。

虽然在SAPs组中，肝脏MDA含量有所下降，且肝脏GSH含量、T-SOD和CAT

活力也有不同程度的升高，但与M组相比并无显著性差异(p0.05)。在病理切

片中，SAPs组的肝细胞及肝索结构相较于M组更加清晰与完整，而肾脏细胞及

其结构基本没变化。综上所述，SAPs可通过提高机体抗氧化能力、减少脂质蓄

积以及炎症因子释放量，达到保肝护肝的作用效果。

（3）为明确SAPs（SAPs5和GTYW）干预调节急性酒精性肝损伤的作用机

制，基于Illuminahiseq测序平台进行转录组学研究。结果表明：提取所得各实

验小鼠的肝脏组织RNA纯度与质量较高（OD260/280≥1.95，OD260/230≥2.14，

浓度≥1000ng/μL，RIN值≥7.00），经过RNA-seq测序，测序数据的质控以及

比对结果良好（测序碱基的平均错误率0.03%，Q2097%，Q3091%，Total

mapped90%）。通过差异分析，以M作为参照，GSH、SAPs5和GTYW分别

上调基因696、1076和1285，下调基因677、661与1012。经过功能分析，得到

SAPs干预后的差异基因主要富集在与炎症、氧化应激及脂质代谢相关的反应过

程及代谢通路中。通过SAPs的干预，可显著上调基因Acsl1、Aqp8、Aox1、Gclc

和Srebf1，下调Cxcl1、Il1r1和Lbp基因(p0.05)，发挥促进脂质代谢、减少炎

症因子释放、缓解氧化应激损伤的作用。

关键词：

豆粕源抗氧化肽，序列鉴定，急性酒精性肝损伤，预防作用，转录组学

Abstract