练习血红蛋白的提取和分离.ppt

（3）样品加入与洗脱注意：正确的加样操作是：1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。第31页,共36页，星期六，2024年，5月在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是AA、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果B、气泡阻碍蛋白质的运动C、气泡与蛋白质发生化学反应D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密第32页,共36页，星期六，2024年，5月样品的加入和洗脱的操作不正确的是AA．加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D．用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面A第33页,共36页，星期六，2024年，5月下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（A）A．可采集猪血作为实验材料B．用蒸馏水重复洗涤红细胞C．血红蛋白释放后应低速短时间离心D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液A第34页,共36页，星期六，2024年，5月二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。（2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。（3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。（4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。第35页,共36页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第36页,共36页，星期六，2024年，5月**D关于练习血红蛋白的提取和分离思考1分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。思考2蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。第2页,共36页，星期六，2024年，5月一、基础知识：㈠凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法第3页,共36页，星期六，2024年，5月3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快第4页,共36页，星期六，2024年，5月用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质(D)A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快4、具体过程第5页,共36页，星期六，2024年，5月第6页,共36页，星期六，2024年，5月相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B第7页,共36页，星期六，2024年，5月㈡缓冲溶液：1、作用：能够抵制（）对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱PH值第8页,共36页，星期六，2024年，5月2、缓冲溶液的配制3.为什么在本实验中实用缓冲溶液在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）第9页,共36页，星期六，2024年，5月㈢电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理：第10页,共36页，星期六，2024年，5月3.分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定（）通常用SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量第11页,共36页，星期六，2024年，5月使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异第12页,共36页