编辑Ehd1启动子改良水稻品种及PHYB调控Ehd1的分子机制研究.pdf

摘要

水稻（OryzasativaL.）是重要的粮食作物，抽穗期决定了水稻品种的种植区域和

栽培季节，是水稻重要的农艺性状。在水稻抽穗期调控网络中，整合者基因Ehd1接收

上游多种信号并调控下游成花素基因Hd3a/RFT1的转录。Ehd1的高表达虽然促进抽穗

但负调控产量相关的农艺性状。粳稻在华南地区种植极早抽穗，农艺性状差，极需延

长抽穗期提高产量。本研究利用基于微同源介导修复（Microhomology-MediatedEnd

Joining,MMEJ）的CRISPR/Cas9技术编辑粳稻中嘉8号（ZJ8）的Ehd1启动子区，获得

大量Ehd1功能弱化的突变体，从中筛选抽穗期稍延迟且农艺性状提升的新育种材料。

Ehd1的表达受到多个上游信号调控，PHYB是重要的光敏色素，phyb突变体抽穗

早。然而PHYB调控抽穗是否通过Ehd1，PHYB与Ehd1间的分子遗传调控机制仍不清楚。

本研究在中花11（ZH11）背景下创建了ehd1与phyb单突变和双突变材料，探究二者之

间的遗传和分子调控关系。

本研究的主要结果如下：

（1）分析Ehd1启动子区的顺式调控元件，基于MMEJ设计CRISPR/Cas9靶点

构建编辑载体，通过遗传转化，获得大量的突变体。选择T1和T2代中抽穗期表型介

于野生型和基因敲除突变体之间的材料，调查抽穗期和农艺性状，检测Ehd1、Hd3a

和RFT1的表达，利用第三代测序技术对Ehd1突变体测序并分析靶点突变情况。在

T2代筛选出纯合等位突变且无T-DNA插入，抽穗期略延迟和农艺性状提高的材料。

（2）通过CRISPR/Cas9编辑技术获得ZH11背景下，ehd1和phyb单突变、双突

变材料。phyb抽穗早，失去感光性；phybehd1延迟抽穗，抽穗期类似ehd1。说明PHYB

位于Ehd1上游，通过Ehd1延迟抽穗。

（3）对phyb单突变体和ZH11进行叶片转录组测序，经qRT-PCR验证，直接调

控Ehd1的Ghd7和PRR37表达量下调。表明PHYB在转录水平，通过促进Ghd7和

PRR37间接抑制Ehd1的转录来延迟抽穗。

（4）通过Pull-down实验证明Ehd1能够与PHYB蛋白互作，PHYB在籼粳间有

四个保守的核苷酸变异位点（SNPs）。通过酵母双杂交实验证明是Ehd1的Receiver

结构域与PHYB的感光模块结合，且Ehd1与籼稻中的PHYB互作明显强于粳稻中的

PHYB。暗示PHYB可能在蛋白水平通过与Ehd1互作来调控水稻抽穗。

本研究通过编辑Ehd1启动子，在T2代就获得Ehd1功能弱化的突变体，为作物

品种改良提供一种新策略，对扩大优良品种的种植范围有重要意义。本研究还初步明

I

确了PHYB在转录水平，也可能同时在蛋白水平抑制Ehd1，延迟水稻抽穗。

关键词：水稻抽穗期；Ehd1；PHYB；启动子编辑；品种改良

II

英文缩略词（符号表）

英文缩写英文全称中文全称

AmpAmpicillin氨苄青霉素

AdeAdenine腺嘌呤

aaAminoacidresidue氨基酸残基

bpBasepair碱基对

成簇的有规律的间隔回文重复

CRISPRClusteredregularlyinterspacedshort