第五单元 动物细胞工程（教师版）.docx

细胞工程

动物细胞工程

动物细胞工程包括：动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植。(P43)

一、动物细胞培养

1.动物细胞培养概念：指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。(P43)

2.动物细胞培养的原理：细胞增殖（有丝分裂）。

3.动物细胞培养的地位：动物细胞工程的基础。(P43)

4.动物细胞培养的关键操作：原代培养和传代培养。(P45)

（一）动物细胞培养的条件

1.动物细胞培养的条件：营养条件、无菌、无毒的环境、适宜的温度、pH和渗透压、适宜的气体环境。(P43)

2.营养物质主要包括：糖类、氨基酸、无机盐、维生素等。(P43)

3.未知营养条件：使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。(P44)

4.血清的作用：提供尚未全部研究清楚的细胞所需的营养物质。(P44)

5.动物细胞培养的培养基的物理性质：培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。(P44)

6.动物细胞利用的营养物质包括蔗糖和淀粉吗？不包括。

7.保证无菌、无毒环境的具体措施(P44)

（1）对培养液和所有培养用具进行灭菌处理。

（2）在无菌环境下进行操作。

（3）还需要定期更换培养液。

8.培养液的灭菌方法：湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌）。

培养用具的灭菌方法：湿热灭菌法（+烘干）或干热灭菌法。

9.怎样保证无菌操作？

对操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒，保证所有操作均在在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。

10.为什么培养液需要定期更换？(P44)

以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。

11.如何防止培养过程中的微生物污染？

在细胞培养液中添加一定量的抗生素。

12.哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。(P44)

13.多数动物细胞生存的适宜pH为7.2-7.4。(P44)

14.维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。

15.动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。(P44)

16.O2的作用：O2是细胞代谢所必需的。

CO2的作用：CO2的主要作用维持培养液的pH。(P44)

17.培养容器：通常采用培养皿或松盖培养瓶。(P44图)

培养仪器：含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱。(P44)

18.因此动物细胞培养的气体环境为95%空气和5%CO2。(P44)

（二）动物细胞培养的过程

取动物组织制成细胞悬液转入培养液原代培养分瓶传代培养

1.动物细胞培养取材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。

取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。

2.制成细胞悬液的步骤(P44)

（1）将组织分散成单个细胞。

（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。

3.将组织分散成单个细胞的原因

（1）从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；

（2）能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。

4.将组织分散成单个细胞的方法

(1)机械法;(2)用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。

5.用胰蛋白酶分散细胞，可以说明什么问题？

动物细胞间的物质主要是蛋白质。

6.可以用胃蛋白酶分散细胞吗？不可以。

为什么？胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。

7.酶解法较温和，一定不会对动物细胞造成损伤吗？

不是，使用胰蛋白酶时，要控制好作用时间，因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的蛋白质，长时间作用还会分解细胞膜蛋白等，对细胞造成损伤。

8.体外培养的动物细胞的两大类：(P44)

（1）能够悬浮在培养液中生长增殖。

（2）大多数需要贴附于某些基质表面才能生长增殖（细胞贴壁）。

9.两类细胞的生长特点(P44)

（1）悬浮生长类：会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。

（2）贴壁生长类：除会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻外，还会发生接触抑制。

10.“细胞增殖到互相接触的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖，出现接触抑制的现象”试结合上述解释，举例说明哪种细胞最可能无接触抑制现象，并阐述原因：癌细胞，癌细胞的细胞膜上糖蛋白等物质减少。

11．原代培养：通常将分瓶之前的细胞培养，即指动物组织经处理后的初次培养。(P45)

12.原代培养的具体做法：将初次制备好的细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。(P44)

13．传代培养：将分瓶后的细胞培养。(P45)

14.分瓶传代培养的具体做法(P45)

（1）收集细胞a.悬浮生长类：直接用离心法收集