骨代谢异常的生物化学检验.ppt

第四节骨代谢异常的生物化学检测指标第53页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）血清钙的测定1.血清总钙（TCa2+）的测定滴定法（氧化还原滴定法、络合滴定法）比色法邻甲酚酞络合酮法WHO和我国推荐的常规方法甲基麝香草酚蓝法偶氮胂Ⅲ法火焰光度法原子吸收分光光度法IFCC推荐的参考方法同位素稀释质谱法IFCC推荐的决定性方法一、血清钙、磷、镁检测第54页，共88页，星期日，2025年，2月5日2.血清游离（离子）钙测定生物学法透析法超滤法金属指示剂法离子选择性电极法(ISE)目前应用最多，此方法简便、快速、重复性好，正确和敏感性高，已成为钙离子测定的参考方法。第55页，共88页，星期日，2025年，2月5日（二）血清磷测定磷钼酸还原法我国推荐的常规方法非还原法染料结合法紫外分光光度法黄嘌呤氧化酶法WHO推荐的常规方法CV—多元络合超微量测定法同位素稀释质谱法决定性方法原子吸收分光光度法等第56页，共88页，星期日，2025年，2月5日（三）血清镁测定比色法我国推荐MTB法钙镁试剂法作为常规方法荧光法离子层析法离子选择性电极法(ISE)酶法原子吸收分光光度法(AAS)参考方法同位素稀释质谱法(ID-MS)等决定性方法第57页，共88页，星期日，2025年，2月5日血清镁测定钙镁试剂是一种金属色原指示剂，在碱性溶液中与镁结合形成紫色复合物检测。加入钙螯合剂EGTA可减少钙的干扰，减少蛋白质及血脂的干扰。甲基麝香草酚蓝法：MTB与镁形成蓝色复合物，加入EGTA可减少钙的干扰。第58页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）甲状旁腺激素测定放射免疫法酶联免疫法免疫化学发光法ELISA法是新近发展起来的方法，具有快速、灵敏、无同位素污染的优点,该法最小检测量为2pg／ml，批内及批间CV分别为2.7％～2.9％和7.9％～8.6％。回收率为93％～94％。二、骨代谢相关激素检测第59页，共88页，星期日，2025年，2月5日（二）1,25-(OH)2-D3的测定放射竞争性结合法（CPB）放射受体测定法（RRA）放射免疫法（RIA）高效液相色谱法（HPLC）由于1,25-(OH)2-D3是血清中维生素D的主要活性形式,故是反映维生素D状况的最佳指标。第60页，共88页，星期日，2025年，2月5日（三）血清降钙素测定RIA：不同来源抗血清灵敏度和特异性不同，不同方法和试剂盒间差异较大，使临床正常水平在实验室之间难以统一。两点免疫法（EIA和IRMA）：测出正常人降钙素的基础水平低于10ng/L～20ng/L，其检出限可小于2ng/L。两点法在诊断甲状腺髓样癌（medullarythyroidcarcinomaMIC）要比大多数竞争性RIA显现出良好的灵敏度和特异性。第61页，共88页，星期日，2025年，2月5日三、骨转换相关标志物检测1.骨钙素测定放射免疫法（RIA法）酶联免疫法（ELISA法）亲和素-生物素酶免疫测定法(BAEIA)化学发光免疫分析法(CLIA)免疫荧光分析法(FIA)等目前应用最多的是RIA法和ELISA法（一）骨形成标志物的检测第62页，共88页，星期日，2025年，2月5日2.骨性碱性磷酸酶测定（1）化学法：先识别或分离出BALP，再测定其碱性磷酸酶的活性。（2）免疫放射法(IRMA)测定BALP：IRMA法定量检测骨ALP可作为筛选试验，高值标本须用电泳法证实除去肝ALP干扰，检测骨ALP过低标本时，以电泳法为首选。（3）化学发光免疫分析法：具有高度的特异性和敏感性，而且操作简便，被认为是目前鉴别和定量分析BALP的最佳方法。第63页，共88页，星期日，2025年，2月5日3.I型前胶原肽I型前胶原羧基端前肽（PICP）I型前胶原氨基端前肽（PINP）检测方法：放射免疫法（RIA法）酶联免疫法（ELISA法）制备抗PINPα1链的抗体建立的免疫标记法是测定PINP的主要方法。第64页，共88页，星期日，2025年，2月5日1.吡啶酚（PYD）和脱氧吡啶酚（DPD）测定方法：HPLC法：用HPLC-荧光检测法测定。ELISA法：用竞争性单克隆抗体测定脱氧吡啶酚。RIA法：用用同位素标记抗体检测吡啶酚。（二）骨吸收标志物检测第65页，共88页，星期日，2025年，2月5日2.I型胶原C端肽和N端肽