蛋白质组学课件.pptx

蛋白質組學

Proteomics;蛋白質是一種複雜的有機生物大分子，它們是生命活動的實際執行者。

幾乎所有的生物催化劑--酶，都是蛋白質。構成細胞骨架和動物大部分結構的纖維物質也是蛋白質；膠原蛋白和角蛋白組成了皮膚，毛髮和軟骨；肌肉大部分也是由蛋白質組成。

蛋白質由一個一個的氨基酸首尾相接形成肽鏈，肽鏈再折疊形成一定空間結構。;;基因組轉錄組蛋白質組;Theeraof‘omics’-basedscience（組學時代）

Genomics（基因組學）

Post-genomicscience（後基因組時代）

Functionalgenomics（功能基因組學）

Transcriptomics（轉錄組學）

Proteomics（蛋白質組學）

Metabonomics/metabolomics（代謝組學）

Structuralgenomics（結構基因組學）

Aim-3Dstructuresofallproteinfolds!

;基因組告訴你，理論上能夠發生什麼？;;蛋白質組學（proteomics）：

以蛋白質組為研究對象，分析細胞內動態變化的蛋白質組成成分、表達水準與修飾狀態，瞭解蛋白質之間的相互作用與聯繫，在整體水準上研究蛋白質的組成與調控的活動規律。;功能蛋白質組：細胞在某一階段或與某一生理現象相關的所有蛋白質。

差異蛋白質組：不同種類或狀態下各種樣本之間蛋白質組的區別與變化。;3.2蛋白質組學的研究;;基於凝膠的工作流程是目前使用的較為廣泛的、發展最為成熟的工作流程;;;樣品分離;第一向等電聚焦IEF;第二向SDS;染色方法;2-DE的缺點;新型非凝膠技術;Cellculture;微量測序（microsequencing）;質譜分析（Massspectrometry）;;主要質譜類型;MALDI;MALDI最大的特點是離子電荷通常為1-2個，而不象ESI中為多電荷離子，對分子品質較大的樣品而言，不會形成複雜的多電荷圖譜，因而對圖譜的解析比較清楚。;ESI;沒有直接的外界能量作用於分子，因此對分子結構破壞較少，是一種典型的“軟電離”方式。

可形成多電荷離子，因此在較小的m/z範圍內可以檢測到大分子品質的分子。採用電噴霧質譜目前可測定分子質

量100kDa以下的蛋白質，最高可達150kDa。

由於採用液相方式進樣，可與蛋白質化學中常用的液相色譜聯用，即液相色譜-電噴霧質譜(LC-ESIMS)。

在常規電噴霧質譜中，噴霧的過程易形成較大液滴，液

滴中的樣品分子在離子源就不能完全離子化，從而降低

了樣品的利用率和靈敏度。;鑒定與注釋蛋白質的路線;PMF;MS-MS1205;MS-MS1465;MS-MS1913;;PMF或二級質譜匹配檢索常用搜索引擎MASCOT();;優點：微型化，集成化，高通量化。

如腫瘤標誌物抗體晶片等;內源標準化處理;酵母雙雜交系統（Yeasttwo-hybridsystem）;利用酵母雙雜交技術篩選新的相互作用蛋白：

DNA-BD+Baitprotein

AD+cDNA文庫的基因

將陽性反應的酵母菌株中的AD-LIBRARY載體提取分離出來，從而對載體中插入的文庫基因進行測序和分析，研究與已知基因在生物學功能上的聯繫。;TheEnd