基因诊断(1)课件.pptxVIP

基因診斷;第一節 基因診斷的概念及

常用技術;基因診斷

利用分子生物學技術，從DNA/RNA水準檢測基因的存在,分析基因的結構變異和表達狀態，從而對疾病作出診斷。

基因診斷檢測的目標分子是DNA或RNA，反映基因的結構和功能。檢測的基因有內源性(即機體自身的基因)和外源性正如病毒、細菌等〉兩種，前者用於診斷基因有無病變，後者用於診斷有無病原體感染。;二基因診斷的特點;三、基因診斷常用方法;(一)核酸分子雜交;probe;核酸分子雜交流程;核酸雜交方法分類;固相雜交分類;Southernblot

是最經典的基因分析方法，不但能檢出特異的DNA片段，而且能進行定量和測定分子量，可用於基因的酶切圖譜分析、RFLP、基因缺失型突變分析等。

;Northern雜交;斑點雜交（Dotblot）或狹縫雜交;反向斑點印跡雜交(reversedotblothybridization);原位雜交

（Colonyinsituhybridization）;螢光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization，FISH);螢光原位雜交（FISH）;掛鎖FISH(FISHwithpadlock);菌落雜交法(colonyhybridization);夾心雜交法(sandwichhybridization);固相夾心雜交法示意圖;（二）PCR及衍生技術;聚合酶鏈式反應

(polymerasechainreaction,PCR）;RT-PCR;螢光定量PCR;多重PCR

檢測特定基因序列的存在或缺失;長片段PCR;（三）結合PCR進行基因診斷的其他技術;限制性片段長度多態性分析

（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）;;設計適當的擴增引物，使擴增片段包括某一個或數個限制性內切酶識別序列，在PCR擴增後用該限制酶切割PCR產物，根據電泳後酶切片段長度變化，即可作出診斷。;;單鏈構象多態性分析

（single-strandconformationpolymorphism,SSCP）;PCR-SSCP分析原理示意;;（四）DNA序列測定（DNAsequencing）;DNA序列測定原理(雙去氧末端終止法);（三）DNA序列測定;左側：正常；右側突變;（四）DNA晶片技術;（六）生物晶片（biochips）;基因晶片雜交流程示意圖;基因診斷中常用的分子生物學方法比較