3.3基因工程及其技术第3课时课件-2高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

第1节基因工程及其技术

第3课时;

阐明基因工程的原理，能运用流程图的形式概括出基因工程的

基本操作程序。;

如果利用大肠杆菌生产人类胰岛素，将需要经过哪些步骤呢?

基因工程产品

胰岛素基因胰岛素

重组体

大肠杆菌;

目的基因的检测与鉴定

leafdiscsincubatedwith

geneticallyengineered

Agrobacteriumfor24h

selectionmediumallows

onlyplantcellsthat

haveacquiredDNAfrom

thebacteriato

proliferate

growup

rooted

seedling;

一、目的基因的获取

◆自主阅读P94

1.目的基因主要是编码蛋白质的基因

例如：与生物抗逆性相关的基因

与优良品质相关的基因

与生物药物和保健品相关的基因

与毒物降解相关的基因

与工业所需用酶相关的基因等;

基因1基因2基因3

DNA片段;

启动子;

思考：区分启动子和终止子与起始密码子和终止密码子?;

项目;

◆真核细胞的基因结构(补充内容):

间隔的、不连续的

编码区

编码区上游

启动子

外显子内含子;;

新知讲授

一、目的基因的获取

2.获取目的基因的常用方法：

化学方法直接人工合成

从基因文库中获取目的基因

利用PCR技术扩增目的基因

从生物组织中直接获取;

①反转录法*:主要用于相对分子质量较大而又不知其核苷酸序列的基因。

它以目的基因的mRNA为模板，借助逆转录酶合成双链DNA,其过程如下：;

合成基因的部分寡核苷酸片段

适当条件下退火得到模板—引物复合体

在dNTP存在的条件下，通过Klenow酶将双链DNA的突出5端补平，

合成相应的互补链，再用相应的

DNA连接酶修复缺口，获得两条完整的互补双链;

基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体

中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。;

某种生物的DNA

限制酶

多个DNA片段

与载体重组

导入受体菌储存

其目的是分离有用的目的基因和

保存某种生物的全部基因。;

单链DNA

DNA聚合酶

双链DNA

与载体重组

导入受体菌??储存;

文库类型;

答：用DNA探针从基因文库中准确提取目的基因

根据目的基因的核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链，并用同位素标记，即成为探针。用这一探针探查基因文库中已经变性的DNA片段(单链),如果有一个DNA片段能和探针片段互补而结合成双链(分子杂交),这一片段即含有所需要的基因。;

马新知讲授

2.真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗?;

◆PCR——多聚酶链式反应

是一项在生物体外对目的基因进行扩增的技术。通过此技术，可

获取大量的目的基因(优点)。;

◆原理：DNA复制

◆前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列(为了合成引物)

◆原料：模板DNA;DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶(Taq酶);

◆方式：以指数方式扩增，即2n(n为扩增循环的次数);

dCTP

dATP且且dGTP

热稳定DNA

每一循环拷贝数加倍

延伸

0nASAnnn

加热至90-95℃

DNA解链

冷却至55-60℃

引物结合到互补DNA链

互补链的合成

退火;

新知讲授

2.4从生物组织中直接获取

——DNA的粗提取与鉴定

DNA从哪

儿提取?

DNA的提取和(鉴定;

DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，

能溶于物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液，→溶解DNA

在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小

在一定温度下，DNA被二苯胺试剂染成蓝色→鉴定DNA;

2.实验材料：

一般选取鸡血来提取DNA,鸡血中血细胞含量高，DNA含量丰富，材

料易得，细胞易吸水涨破。也可以选用植物细胞如洋葱等，只是破碎植物细胞比较麻烦，提取洋葱DNA时，需先将洋葱切碎，然后加入一定量的洗涤剂和食盐，进行充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

◆洗涤剂作用：溶解细胞膜、核膜，释放出细胞内含物

◆食盐的作用：使构成染色体的核蛋白加速解聚，游离出DNA分子，并使DNA分子充分溶解于NaCl溶液中

注意：该实验中不能选用猪血处等哺乳动物的血，因为哺乳动物成