TJAASS_82021_血清4型禽腺病毒病诊断技术规程.docxVIP

ICS11.220

CCSB41

团 体 标 准

T/JAASS8-2021

血清4型禽腺病毒病诊断技术规程

Technicalspecificationfordiagnosisofthediseaseofserotype4fowladenovirus

2021－08－17发布 2021－08－17实施

江苏省农学会发布

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PAGE\*ROMANIII

PAGE\*ROMAN

PAGE\*ROMANIV

目 次

前 言 V

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

缩略语 1

临床诊断 2

流行病学 2

临床症状 2

剖检病变 2

PCR检测 2

器材 2

试剂 2

操作方法 3

结果判定 3

病毒分离 3

器材 3

LMH细胞 4

试剂 4

操作方法 4

结果判定 4

间接免疫荧光鉴定 5

器材 5

LMH细胞 5

试剂 5

操作方法 5

结果判定 6

血清抗体检测 6

器材 6

试剂 6

操作方法 6

结果判定 7

综合判定 7

附录A（规范性）溶液配制 8

磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol/L，pH7.4）的配制 8

组织研磨液的配制 8

细胞培养液的配制 8

细胞维持液的配制 8

细胞固定液的配制 8

50×TAE缓冲液的配制 8

1%琼脂糖凝胶的配制 9

附录B（资料性）血清4型禽腺病毒感染鸡群典型剖检病变 10

附录C（资料性）阳性对照病毒 11

阳性对照病毒来源 11

附录D（资料性）PCR检测引物及判定标准 12

血清4型禽腺病毒PCR检测引物 12

引物的稀释 12

PCR检测判定标准图例 12

PCR扩增片段参考序列 13

附录E（资料性）间接免疫荧光鉴定用单克隆抗体及判定标准 14

单克隆抗体的来源 14

间接免疫荧光鉴定判定标准图例 14

附录F（规范性）血清4型禽腺病毒抗体检测ELISA试剂盒使用溶液的配制 15

包被缓冲液 15

封闭液 15

样品稀释及洗涤液[含0.05%（体积分数）吐温-20的0.01mol/LPBS溶液] 15

终止液 15

附录G（规范性）血清4型禽腺病毒抗体检测ELISA试剂盒抗原包被板及阴性、阳性对照血清的制备

. 16

血清4型禽腺病毒抗体检测试剂盒抗原包被板的制备 16

阴性对照血清的制备 16

阳性对照血清的制备 16

前 言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则编写。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由扬州大学提出。

本文件由江苏省农学会归口。

本文件起草单位：扬州大学、中国农业科学院上海兽医研究所。

本文件主要起草人：叶建强、陈鸿军、秦爱建、谢松桦、谢泉、王伟康、吕璐、邵红霞、万志敏、李拓凡。

引 言

依据血清交叉中和试验，禽腺病毒（Fowladenovirus，FAdV）目前可分为12个血清型，即FAdV-1~FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9~FAdV-11。临床上，FAdV感染主要引起鸡的包涵体肝炎，肝炎-心包积液综合症及肌胃糜烂等症状。自2015年以来，国内大部分家禽密集养殖地区

均爆发由高致病性血清4型禽腺病毒（FAdV-4）感染引起的肝炎-心包积液综合症。鸡群临床感染FAdV-4的死淘率可达30~80%。FAdV-4不仅可以水平传播，还可以通过鸡胚进行垂直传播。值得注意的是，当前除了在国内爆发，FAdV-4在印度、加拿大、匈牙利、日本、韩国及波兰等国家也陆续流行，正给国内外养鸡业造成不可估量的经济损失。虽然国内外已有一些FAdV-4检测方法的研究报道，但是目前尚无FAdV-4的标准化病原分离及其特异性抗原、抗体诊断技术标准。因此，制定了《血清4型禽腺病毒病诊断技术规程》标准。本标准包括FAdV-4感染鸡群临床诊断、病毒分离方法、PCR检测方法、间接免疫荧光检测病原方法和ELISA抗体检测方法，适用于FAdV-4的诊断预警及免疫防控。

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