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PCR上岗证考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下关于PCR技术基本原理的描述，错误的是（）

A.依赖DNA聚合酶的链式反应

B.通过温度变化实现双链DNA的解链与复性

C.每次循环包括变性、退火、延伸三个阶段

D.扩增产物的长度由模板DNA的长度决定

答案：D（扩增产物长度由引物在模板上的结合位置决定）

2.TaqDNA聚合酶的最适反应温度是（）

A.55℃B.72℃C.94℃D.60℃

答案：B（Taq酶的最适延伸温度为72℃左右）

3.引物设计时，GC含量通常建议控制在（）

A.10%-20%B.20%-30%C.40%-60%D.70%-80%

答案：C（GC含量过高或过低会影响引物与模板的结合稳定性）

4.下列哪项不是PCR反应体系的必需成分（）

A.模板DNAB.引物C.限制性内切酶D.dNTPs

答案：C（限制性内切酶用于酶切反应，非PCR必需）

5.实验室进行PCR检测时，样本处理区的主要功能是（）

A.配制反应体系B.核酸提取与纯化C.PCR扩增D.产物分析

答案：B（样本处理区负责样本的前处理和核酸提取）

6.为避免扩增产物污染，实验室应严格遵循（）

A.单向工作流程（试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区）

B.双向工作流程（产物分析区→扩增区→样本处理区→试剂准备区）

C.各区域可交叉使用

D.所有操作在同一区域完成

答案：A（单向流程可防止后区污染前区）

7.内参基因在PCR检测中的主要作用是（）

A.提高扩增效率B.验证样本核酸提取质量C.增加产物量D.降低非特异性扩增

答案：B（内参基因用于监控核酸提取过程是否有效，排除假阴性）

8.以下哪种情况会导致PCR结果出现假阳性（）

A.样本核酸降解B.扩增产物气溶胶污染C.模板量过低D.Taq酶活性不足

答案：B（气溶胶污染是假阳性的主要原因）

9.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是（）

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物达到平台期的循环数

C.引物与模板结合的最佳温度

D.反应体系的初始荧光强度

答案：A（Ct值是定量分析的核心参数）

10.PCR实验室空气消毒最常用的方法是（）

A.75%乙醇喷洒B.紫外线照射C.甲醛熏蒸D.过氧乙酸擦拭

答案：B（紫外线可有效破坏DNA/RNA结构，是实验室常规空气消毒手段）

11.进行新冠病毒核酸检测时，若样本Ct值为38，应如何处理（）

A.直接判定为阳性B.直接判定为阴性C.重新提取核酸并复检D.无需处理

答案：C（需结合实验室标准，通常Ct值≥35需复检确认）

12.引物二聚体形成的主要原因是（）

A.引物GC含量过低B.引物3’端互补配对C.模板浓度过高D.退火温度过高

答案：B（引物3’端互补易形成二聚体）

13.下列关于dNTP的描述，错误的是（）

A.提供DNA合成的原料B.浓度过高会抑制Taq酶活性

C.四种dNTP浓度需相等D.可替代引物参与扩增

答案：D（dNTP是原料，引物是起始点，不可替代）

14.实验室生物安全二级（BSL-2）的基本要求不包括（）

A.配备生物安全柜B.人员需接种疫苗C.操作区与办公区分离D.废弃物高压灭菌

答案：B（BSL-2不强制要求所有人员接种疫苗）

15.扩增产物电泳时出现smeared条带（弥散条带），可能的原因是（）

A.退火温度过高B.模板量过低C.dNTP浓度过高D.引物特异性差

答案：D（引物特异性差会导致非特异性扩增，出现弥散条带）

16.以下哪种物质可有效抑制PCR反应（）

A.EDTAB.甘油C.牛血清白蛋白（BSA）D.二甲基亚砜（DMSO）

答案：A（EDTA可螯合Mg2+，抑制Taq酶活性）

17.定量PCR标准曲线的R2值应至少达到（）

A.0.8B.0.85C.0.9D.0.98

答案：D（标准曲线R2≥0.98才能保证定量准确性）

18.核酸提取过程中，加入蛋白酶K的主要目的是（）

A.裂解细胞膜B.消化蛋白质，释放核酸C.沉淀核酸D.去除RNA

答案：B（蛋白酶K降解蛋白质，使核酸游离）

19.PCR反应中，Mg2+浓度过低会导致（）

A.非特异性扩增B.扩增效率降低C.引物二聚体增多D.产物量增加

答案：B（Mg2+是Taq酶的辅因子，浓度过低影响酶活性）

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