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皮肤科常用实验室检查操作规范（真菌镜检、过敏原检测）

第一章总则

一、制定依据

本规范依据《医疗机构临床实验室管理办法》《医学检验实验室质量和能力认可准则》（CNAS-CL02:2022）、《临床微生物学检验规范（2024版）》、《过敏原体外诊断试剂临床应用指南（2025版）》、《皮肤真菌病诊疗指南（2024年更新）》及GB19489-2024《实验室生物安全通用要求》制定。结合皮肤科实验室检测技术发展趋势，融入数字化镜检、标准化过敏原检测等理念，适配各级医疗机构皮肤科及医学检验科的临床实践需求，确保检测结果准确、可靠、可追溯。

二、核心目标

质量目标：真菌镜检阳性检出率≥90%（参照标准菌株对照），过敏原检测结果与临床诊断符合率≥85%，室内质控合格率100%，室间质评结果满意率≥95%。

安全目标：建立“操作-防护-处置-追溯”全链条安全管理机制，职业暴露发生率≤0.1%/年，医疗废物规范处置率100%，实验室生物安全事故发生率为0。

效率目标：真菌镜检报告出具时间≤2小时，常规过敏原体外检测报告≤24小时，皮肤点刺试验即时出结果，急诊检测优先处置响应时间≤30分钟。

管理目标：实现检测全流程标准化，建立完善的仪器设备、试剂、人员管理档案，检测记录完整率100%，问题整改闭环率100%。

三、适用范围

本规范适用于各级医疗机构皮肤科实验室、医学检验科及皮肤病专科医院检验科，涵盖门诊、住院患者及健康体检人群的相关检测项目。适用检测对象包括疑似真菌感染（皮肤、毛发、甲、黏膜等部位）及过敏性皮肤病（湿疹、荨麻疹、特应性皮炎等）患者。

参与检测的人员需具备相应资质：检验技师及以上职称人员负责检测操作与结果审核；护士及以上资质人员可协助进行皮肤点刺试验等体内检测的样本采集；实验室负责人需具备中级及以上职称，且经过生物安全专项培训。

四、基本原则

标准化原则：严格遵循本规范及配套操作流程，所有检测步骤均需符合行业标准，确保不同操作者、不同时间的检测结果具有一致性。

准确性原则：采用经国家药品监督管理局批准的试剂与仪器，定期开展质控校验，确保检测结果真实反映受检者实际情况。

生物安全原则：落实实验室生物安全分级管理要求，所有操作均需在相应生物安全级别环境下进行，做好个人防护与废弃物处置。

患者权益保护原则：检测前充分告知患者检测目的、流程、风险及知情同意书内容；保护患者隐私，检测数据仅限临床诊疗使用；尊重患者知情权与选择权。

持续改进原则：定期分析检测质量数据、不良反应报告及临床反馈，运用PDCA循环（计划-执行-检查-处理）优化操作流程，提升检测质量。

第二章真菌镜检操作规范

一、检测原理与适用范围

（一）检测原理

真菌镜检是利用真菌细胞壁含有的几丁质、纤维素等成分可被氢氧化钾（KOH）等碱性溶液软化、透明，而真菌孢子和菌丝的形态结构得以保留的特性，通过显微镜观察标本中是否存在真菌病原体，初步判断真菌感染类型。墨汁负染色法则通过印度墨汁的背景对比，清晰显示新型隐球菌等有荚膜真菌的形态特征。

（二）适用范围

疑似皮肤真菌感染：体癣、股癣、手癣、足癣、花斑癣等，采集皮损边缘鳞屑或水疱液。

毛发真菌感染：头癣（黄癣、白癣、黑点癣），采集病发及发根鳞屑。

甲真菌感染：甲癣（灰指甲），采集病甲边缘或甲下碎屑。

黏膜真菌感染：口腔念珠菌病、外阴阴道念珠菌病，采集黏膜分泌物或伪膜。

深部真菌感染筛查：疑似隐球菌性脑膜炎采集脑脊液，肺真菌病采集痰液或支气管肺泡灌洗液。

二、仪器与试剂准备

（一）核心仪器

光学显微镜：配备10×目镜、4×（低倍）、10×（低倍）、40×（高倍）物镜，具备微调焦功能，分辨率≥0.2μm，配备环形光源或斜射光装置。

恒温孵箱：控温范围25-37℃，精度±0.5℃，用于标本预热软化。

离心机：转速范围0-10000r/min，用于脑脊液等标本的离心浓缩。

电子天平：精度0.01g，用于试剂配制。

移液器：规格0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL，经校准合格。

载玻片与盖玻片：载玻片规格76mm×26mm，厚度1-1.2mm；盖玻片规格18mm×18mm或22mm×22mm，厚度0.13-0.17mm，无划痕、无杂质。

（二）试剂配制与质量控制

10%-20%氢氧化钾（KOH）溶液

配制方法：称取10g（20%浓度称取20g）KOH粉末，加入80mL（20%浓度加入70mL）纯化水，搅拌至完全溶解，定容至100mL，分装于带刻度的滴瓶中，室温保存，有效期3个月。

质量要求：溶液澄清透明，无沉淀；每周随机抽取1瓶进行pH值检测，10%浓度pH≥13.0，20%浓度pH≥13.5。

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