酶工程制药课件.pptVIP

3）交聯法制備固定化酶技術反應速度與酶濃度、試劑濃度、pH、離子強度、溫度、反應時間有關。酶-輔助蛋白交聯法：活回收率及機械強度高吸附交聯法：吸附+交聯——殼狀固定化酶載體交聯法：載體——試劑——酶4）共價結合法制備固定化酶技術：應用少二、固定化細胞的製備1、固定化細胞：利用細胞內酶或酶系，比固定化酶應用更普遍。2、固定化細胞的特點：細胞特性、催化劑功能、固相催化劑特點不需進行酶的分離純化細胞保持酶的原始狀態，酶的回收率高細胞內酶比固定化酶更穩定細胞內酶的輔助因數可自動再生細胞含多酶體系，可催化一系列反應抗污染能力強3、固定化細胞的製備技術適於胞內酶，底物與產物易透過細胞膜，胞內不存在產物分解系統及其它不良反應。載體結合法、包埋法、交聯法、無載體法1）載體結合法優點：操作簡單、符合細胞生理條件、不影響細胞的生長及酶活性。缺點：吸附容量小、結合強度低，應用不廣2）包埋法優點：細胞容量大、操作簡便、酶的活力回收率高。缺點：擴散阻力大、易改變酶的動力學行為、不適合催化大分子底物與產物的轉化反應。3）交聯法：試劑的毒性破壞細胞、損害細胞活性、應用少。4）無載體法：細胞自身絮凝（助凝劑、選擇性熱變性）優點：細胞密度高、條件溫和缺點：機械強度差三、固定化方法與載體的選擇依據1、固定化方法的選擇固定化酶應用的安全性固定化酶在操作中的穩定性固定化成本2、載體選擇價廉易得、底物性質四、固定化酶的形狀與性質1、固定化酶的形狀顆粒狀固定化酶：酶珠、酶塊、酶片、酶粉等，各種方法均可制得，方法簡單，比表面積大，轉化效率高，適合各種類型反應器。纖維狀固定化酶：比表面積大，轉化效率高，適合填充床反應器。膜狀固定化酶（酶膜）：表面積大、滲透阻力小、用於酶電極、破碎用於填充床反應器。管狀固定化酶（酶管）：機械強度大、切短用於填充床反應器、組裝成列管式反應器。2、固定化酶的性質1）酶活力的變化：下降2）酶穩定性的變化：增加/降低（少）操作穩定性：T1/2＞1個月貯藏穩定性：即用。加底物、產物、抑制劑、防腐劑等熱穩定性：熱穩定性高——工業意義大對蛋白酶的穩定性：提高3）酶學特性的變化底物專一性：對高分子底物的活性下降最適pH：負電荷載體——堿，正電荷載體——酸，中性載體——不變最適溫度：升高米氏常數（Km）：底物分子大則增加幅度大最大反應速度（Vm）：變化不大五、固定化細胞的形狀與性質1、固定化細胞的形狀多用包埋法制備各種形狀的固定化細胞2、固定化細胞的性質催化小分子底物，不適合大分子底物提高細胞膜通透性，提高酶活力及轉化率穩定性提高，pH及溫度基本不變六、固定化酶活力的測定方法與天然酶活力測定方法相同控制條件的一致性1、分批測定發：在攪拌或振盪條件下測定2、連續測定法：引反應液至流動比色杯中測定（連續流動反應器）酶工程制藥一、酶的特性及酶工程一、酶的特性1）催化功能（催化劑共性）加快反應速度降低反應活化能不改變反應性質反應前後其數量和性質不變2）催化效率高3）專一性強4）反應條件溫和5）酶的催化效應受調控按催化類型分類氧化還原酶類（LDH、MAO）轉移酶類（COMT、GPT、GOT）水解酶類（ChE、pepsin）裂合酶類（carbonicanhydrase）異構酶類（topoisomeraseII）合成酶（連接酶）類（glutaminesynthetase）二、酶工程（EnzymeEngineering）是酶學與工程學相互滲透結合、發展而形成的新的技術學科。從應用的目的出發研究酶，應用酶的特異催化功能通過工程化將相應的原料轉化成有用物質的技術。酶工程的研究內容1）酶的分離、提純、大批量生產、應用開發2）酶和細胞的固定化及酶反應器的研究3）酶生產中基因工程技術的應用及遺傳修飾酶的研究4）酶分子改造、化學修飾、酶結構與功能關系的研究5）有機相中酶反應的研究6）酶抑制劑、啟動劑的開發與應用研究7）抗體酶、核酸酶的研究8）模擬酶、合成酶及酶分子的設計與合成研究二、酶的來源和生產一、酶的來源生物體中分離提純、化學合成、動/植物細胞與組織培養微生物生產1）種類多2）繁殖快、生產週期短、培養方便、可控制條件提高產量3）適應性強，經遺傳法能培育出新的高產株二、酶的生產1）菌種的要求產酶量高，其性質符合使用要求，胞外酶不是致病菌穩定，不易退化，不易感染噬菌體利用原料價廉，發酵週期短，易於培養2）生產菌的來源菌種保存機構或有關部門自然界分離、篩選遺傳學改良：基因突變、轉移、