酶类药物课件.pptxVIP

;（3）從原料來源是否豐富考慮；

（4）從簡化提純步驟著手

（5）如用動物組織作原料，則此動物宰殺後應立即取材。

從動物或植物中提取酶受到原料的限制，隨著酶應用日益廣泛和需求量的增加，工業生產的重點已逐漸轉向微生物。用微生物發酵法生產藥用酶，不受季節、氣候和地域的限制，生產週期短，產量高，成本低，能大規模生產。

;二、微生物酶製劑高產菌株的選育

菌種是工業發酵生產酶製劑的重要條件。與增加品種、縮短生產週期、改進發酵和提煉工藝條件等密切相關。

優良菌種的獲得有三條途徑：

①是從自然界分離篩選：

②是用物理域化學方法處理、誘變；

③是用基因重組與細胞融合技術。因此微生物的分離篩選是一切工作的基礎。

;三、微生物酶製劑生產的發酵技術

首先要合理選擇培養方法、培養基、培養溫度、pH和通氣量等。還要研究酶的分離提純技術和製備工藝。

（—）原料

利用微生物生產酶製劑的主要原料為碳源和氮源，此外還有無機鹽、生長因素和產酶促進劑等。;如果添加少量某種物質就能明顯增加酶的產量時，這類物質通稱為產酶促進劑。它們大多屬於酶的誘導物或表面活性劑。

1、固體培養法

固體培養法亦稱麩曲培養法，該法是利用麩皮或米糠為主要原料，另外視需要添加其他穀糠、豆餅等，加水拌成含水適度的半固態物料作為培養基。

2、液體培養法

液體培養法是利用液體培養進行微生物的生長繁殖和產酶。根據通氣（供氧）方法的不同，又分為液體表面培養和液體深層培養兩種。;3、影響酶產生的一些因素

菌種的產酶性能是決定發酵效果的重要因素，但是發酵工藝條件對產酶的影響也是十分明顯的。

（1）溫度一般發酵溫度比種子培養時略高些，這樣對產酶有利。

（2）pH可用糖或澱粉調節，pH低則可用氨來調節。;（3）通氣（供氧）臨界氧濃度。氧必須是溶解於培養基中的氧。

（4）攪拌增加液體湍流速度，減少氣泡周圍液膜厚度。有利於促進細胞的新陳代謝。

（5）泡沫和消沫劑由於培養基中蛋白質分子排在氣泡表面形成一層吸附膜，聚集成泡沫層之故。

??6）添加誘導劑和抑制劑誘導酶誘導酶的合成，誘導酶是該酶作用底物或者是其類似物。抑制劑促進酶的形成。加入適量表面活性劑。;第二節酶類藥物的提取和純化

一、生物材料的預處理

（一）動物材料的預處理

1、機械處理

用絞肉機絞，一般細胞並不破碎。有的酶必須細胞破碎後才能有效地提取，在實驗室常用的是玻璃勻漿器和組織搗碎器。

2、反復凍融

冷到-10℃左右，再緩慢溶解至室溫，如此反復多次。由於細胞中冰晶的形成，及剩下液體中鹽濃度的增高，能使細胞中顆粒及整個細胞破碎，從而使某些酶釋放出來。;3、丙酮粉

組織經丙酮迅速脫水乾燥製成丙酮粉，不僅可減少酶的變性，同時因細胞結構成份的破碎使蛋白質與脂質結合的某些化學鍵打開，促使某些結合酶釋放到溶液中，常用的方法是將組織糜或勻漿懸浮於0.0lmol／L，pH6.5的磷酸緩衝液中，在0℃下一邊攪拌，一邊徐徐倒入10倍體積的-15℃無水丙酮內，10分鐘後，離心過濾取其沉澱物，反復用冷丙酮洗幾次，真空乾燥即得丙酮粉。丙酮粉在低溫下可保存數年。

;（二）微生物的預處理

要是酶是胞外酶，則可除去菌體後再直接從發酵液中吸附提取酶。但對胞內酶則需將菌體細胞破壁，製成無細胞的懸液後再行提取。

菌體用生理鹽水洗滌除去培養基後，應深凍保存。

乾燥法，因為乾燥常能導致細胞自溶，增加酶的釋放，從而在後處理中破壁不必太劇烈就能達到預期目的。

1、乾燥法：①空氣乾燥25～30℃②真空乾燥還原劑作保護劑③冷凍乾燥對較敏感的酶宜用此法。

2、機械法：常用的方法有研磨法，組織勻漿法，超聲波法，高壓勻漿法等。;3、酶法處理

用得最多的是溶菌酶，如在37℃，pH8.0下對小球菌進行破壁處理，歷時15分鐘，即可提取核酸酶。也有用去氧核糖核酸酶處理，操作與溶菌酶同。

二、酶的提取

1、水溶液法

常用稀鹽溶液或緩衝液提取。一般在低溫下操作。在酸性條件下穩定的酶要在酸性條件下提取。一般來說，鹼性蛋白酶用酸性溶液提取，酸性蛋白酶用鹼性溶液提取。;鹽濃度一般以等滲為好，相當於0.15mol／LNaCl的離子強度是最適宜於酶的提取。

2、有機溶劑法

某些結合酶如微粒體和線粒體膜的酶，由於和脂質牢固結合，為此必須除去結合的脂質，且不能使酶變性，最常用的有機溶劑是丁醇。

3、表面活性劑法

表面活性劑能與蛋白質結含而分散在溶液中，故可用於提取結合酶。;三、酶製劑的工業提取法

（一）發酵液的預處理及過濾