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无菌检查和微生物限度检查操作规范

无菌检查操作规范

一、适用范围

本操作规范适用于各种药物制剂、原料、辅料以及其他需要进行无菌检查的物品。无菌检查是判断供试品是否无菌的重要手段，以确保产品符合相应的质量标准和使用要求。

二、人员要求

1.操作人员应经过专业的无菌技术培训，熟悉无菌检查的操作流程和相关法规要求。

2.进入无菌检查实验室前，操作人员应穿戴符合要求的无菌工作服、工作帽、口罩和手套，严格遵守人员卫生和消毒规定。

3.操作人员在操作过程中应保持良好的无菌操作习惯，避免人为污染供试品和实验环境。

三、实验室环境要求

1.无菌检查实验室应具备独立的区域，分为准备室、操作室和培养室等。各区域应保持清洁、干燥、通风良好，并定期进行消毒和清洁。

2.操作室应设置在相对独立、不易受到外界干扰的地方，室内应安装空气净化系统，使空气洁净度达到相应的要求（一般为万级背景下的局部百级）。

3.培养室应配备合适的培养设备，如恒温培养箱、恒温水浴箱等，温度和湿度应能满足不同培养基的培养要求，并定期进行校准和维护。

4.实验室应定期进行环境监测，包括空气浮游菌、沉降菌和表面微生物的监测，确保实验环境符合无菌检查的要求。

四、仪器设备和材料要求

1.仪器设备

-无菌检查应使用经过校准和验证的仪器设备，如高压蒸汽灭菌器、干热灭菌器、电子天平、酸度计、集菌仪等。

-高压蒸汽灭菌器应定期进行生物监测和物理监测，确保灭菌效果可靠。干热灭菌器应定期进行温度校准，保证灭菌温度符合要求。

-电子天平应定期进行校准，确保称量准确。酸度计应定期进行校准和维护，保证测量精度。

-集菌仪应选用符合要求的产品，并定期进行清洁和维护，防止污染。

2.材料

-培养基应选用符合质量标准的产品，并按照规定的方法进行配制和灭菌。常用的培养基有硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等。

-稀释剂应选用合适的溶液，如0.9%无菌氯化钠溶液等，并进行灭菌处理。

-滤膜应选用孔径合适、材质符合要求的产品，如0.45μm微孔滤膜等，并进行灭菌处理。

-其他材料如吸管、注射器、培养皿等应选用无菌产品，并在使用前进行检查，确保无破损和污染。

五、供试品的准备

1.供试品的抽样应按照相应的抽样标准进行，确保抽样的代表性。抽样过程中应注意避免污染供试品。

2.供试品的包装应完好无损，如有破损或异常情况，应及时记录并处理。

3.供试品在检查前应进行必要的处理，如去除外包装、表面消毒等。对于某些特殊的供试品，如抗生素类药物，可能需要进行中和处理，以消除其对微生物的抑制作用。

六、操作步骤

（一）薄膜过滤法

1.准备工作

-将集菌仪、滤器等设备进行清洁和灭菌处理。

-准备好所需的培养基、稀释剂、滤膜等材料。

-检查供试品的包装和外观，如有异常情况应及时记录。

2.供试品处理

-取规定量的供试品，加入适量的稀释剂，充分混合均匀。

-将供试品溶液通过灭菌的滤器进行过滤，使供试品中的微生物截留在滤膜上。

-用适量的稀释剂冲洗滤膜，以去除供试品中的残留成分。

3.接种培养

-将滤膜转移至适宜的培养基中，一张滤膜接种一种培养基。

-硫乙醇酸盐流体培养基用于培养厌氧菌和需氧菌，置30-35℃培养；胰酪大豆胨液体培养基用于培养真菌和需氧菌，置20-25℃培养。

-培养时间一般为14天，在培养过程中应定期观察培养基的生长情况。

4.结果判断

-培养结束后，观察培养基中是否有菌生长。如果培养基澄清，判为供试品符合无菌检查要求；如果培养基中有菌生长，判为供试品不符合无菌检查要求。

-若对结果有怀疑，可进行复试。复试时，应取加倍量的供试品，按上述方法重新进行检查。

（二）直接接种法

1.准备工作

-将所需的培养基进行灭菌处理，并冷却至适宜的温度。

-准备好接种用具，如吸管、注射器等，并进行灭菌处理。

-检查供试品的包装和外观，如有异常情况应及时记录。

2.供试品接种

-取规定量的供试品，直接接种至适宜的培养基中。一般来说，每管培养基接种的供试品量应根据供试品的性质和培养基的体积确定。

-硫乙醇酸盐流体培养基用于培养厌氧菌和需氧菌，胰酪大豆胨液体培养基用于培养真菌和需氧菌。

3.培养观察

-将接种后的培养基分别置30-35℃和20-25℃培养，培养时间为14天。

-在培养过程中，应定期观察培养基的生长情况，如是否有浑浊、沉淀、产气等现象。

4.结果判断

-培养结束后