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基因组编辑技术在人类疾病靶向治疗中的应用：机理、发展和应用前景

摘要：基于工程或细菌核酸酶，基因组编辑技术的发展开辟了在几乎所有真核细胞中直接靶向和修饰基因组序列的可能性。基因组编辑通过促进建立更精确的病理过程的细胞和动物模型而扩展了我们阐明遗传学对疾病的作用的能力，并且已开始在从基础研究到应用生物技术和生物医学的各个领域显示出巨大的潜力。在开发可编程核酸酶方面的最新进展，成簇的规则间隔的短回文重复序列（CRISPR/Cas）相关的核酸酶，极大地加快了基因编辑的速度从概念到临床实践。本文对（CRISPR/Cas9）的最新进展进行综述，并讨论了其作为基因编辑工具在各种人类疾病和潜在的未来疗法中的应用。

关键词：CRISPR/Cas9；基因编辑;人类疾病

Applicationsofgenomeeditingtechnologyinthetargetedtherapyofhumandiseases:mechanisms,advancesandprospects

Abstract:Basedonengineeringorbacterialnucleases,thedevelopmentofgenomeeditingtechnologyopensupthepossibilityofdirectlytargetingandmodifyinggenomicsequencesinalmostalleukaryoticcells.Genomeeditinghasexpandedourabilitytoelucidatetheroleofgeneticsindiseasebyfacilitatingtheestablishmentofcellandanimalmodelsofmoreprecisepathologicalprocesses,andhasbeguntoshowgreatpromiseinareasrangingfrombasicresearchtoappliedbiotechnologyandbiomedicinepotential.Recentadvancesinthedevelopmentofprogrammablenucleases,clusteredregularlyspacedshortpalindromicrepeat(CRISPR)-Casrelatednucleases,havegreatlyacceleratedthespeedofgeneeditingfromconcepttoclinicalpractice.ThisarticlereviewsthelatestadvancesinCRISPR/Cas9)anddiscussestheapplicationsofitsderivativereagentsasgeneeditingtoolsinvarioushumandiseasesandpotentialfuturetherapies.

Keywords：CRISPR-Cas9;geneediting;humandisease

引言

近年来，转录激活因子效应物核酸酶(transcriptionactivator—likeeffectornucleases，TALEN)和锌指核酸酶(Zincfingernuclease，ZFN)引入靶向特意双链促进基因组编辑的技术迅速发展，但经改造的CRISPR/Cas9系统可在真核生物和原核生物、病毒等基因组内实现目的基因的插入、缺失，而且效率更高且成本更低。CRISPR/Cas9工作原理是crRNA（CRISPR-derivedRNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activatingRNA）结合形成tracrRNA/crRNA复合物，此复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA[1]。而通过人工设计这两种RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA（singleguideRNA），足以引导Cas9对DNA的定点切割。作为一种RNA导向的dsDNA结合蛋白，Cas9效应物核酸酶是已知的第一个统一因子（unifyingfactor），能够共定位RNA、DNA和蛋白，从而拥有巨