CN115597939A 一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法 （山东政法学院（Cn））.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN115597939A(43)申请公布日2023.01.13

(21)申请号202211276223.1

(22)申请日2022.10.18

(71)申请人山东政法学院

地址250014山东省济南市历下区解放东

路63号

(72)发明人李学博李亮亮

(74)专利代理机构深圳市育科知识产权代理有限公司44509

专利代理师陶秋

(51)Int.CI.

GO1N1/28(2006.01)

GO1N1/30(2006.01)

GO1N1/36(2006.01)

GO1N1/42(2006.01)

权利要求书2页说明书7页附图8页

(54)发明名称

一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法

(57)摘要

CN115597939A本发明公开了一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法，涉及组织切片研究技术领域，特别适应于昆虫蛹期的相关研究中。包括组织预处理与固定、组织脱水、组织透明、组织浸蜡、组织包埋、切片与展片、组织脱蜡、组织染色、组织脱水与透明、封片和观察，最终切片对组织区分度高，能够清晰观察到虫体内各个器官及组织的空间结构。采用该方法处理大头金蝇蛹体，在显微镜下可以清晰观察到脑组织、复眼、体壁、肌肉、消化系统、排泄系统等的结构。本发明为昆虫学中蝇类蛹体组织切片提供了技术方法，可观察昆虫蛹体内部结构的改变，用以相关类群的系统发育研究及种属鉴定等问题，尤其在法以昆虫学中，可用

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CN115597939A权利要求书1/2页

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1.一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法，包括冷却机(1),其特征在于：方法包括以下过程：

S1,组织预处理与固定：

利用昆虫解剖针将蛹壳剥离，注意在解剖时不要用解剖针用力的拨动蛹体，蛹体比较脆弱，极易破坏内部组织，解剖完的虫体放入75%的酒精中清洗，然后将虫体浸于组织固定液中4℃过夜，固定时间不少于12h,本要求的组织固定液为：0.5%多聚甲醛混合固定液；

S2,组织脱水：

取组织固定后的虫体，室温下通过不同梯度的乙醇溶液进行脱水，浓度梯度依次为70%、80%、90%、95%、100%、100%、100%,每个梯度处理时间至少为1h;

S3,组织透明：

取组织脱水后的虫体，室温下在组织透明剂中浸泡；透明剂分别为二甲苯与乙醇体积比为1:2、1:1、2:1的混合液，室温下透明时间分别为30min,最后在100%的二甲苯溶液中透明1h;

S4,组织浸蜡：

65℃下提前将石蜡融化，组织透明后的虫体在石蜡一液体中浸泡4h,然后将虫体放在石蜡二液体中浸泡4h;

S5,组织包埋：

将包埋盒底部浸入一层底蜡，将浸蜡后的虫体置于底蜡中，根据研究内容确定虫体摆放方向，然后浸满石蜡，将包含虫体的整个包埋盒置于冷却机(1)上加速冷却，待完全冷却后，准备用于切片；

S6,切片与展片：

将干净的载玻片提前放在包埋机上预热，包埋机温度设定为40℃,毛笔蘸取切下的薄片置于蒸馏水中，然后拿载玻片吸附水上的切片，切片会自然完全粘附在载玻片上，置于37℃条件下烘片12h以上进行粘片；

S7,组织脱蜡：

将干燥好的载玻片浸泡在100%二甲苯溶液一、100%二甲苯溶液二中，时间分别为5min,然后依次转移到100%、100%、90%、80%、70%乙醇溶液中浸泡6-8min,最后在蒸馏水中处理5min;

S8,组织染色：

取组织脱蜡后的载玻片浸泡在苏木精溶液中，保持10min,蒸馏水一中冲洗40s,蒸馏水二中冲洗30s,随后转移到1%盐酸乙醇溶液中，分色30s,蒸馏水中冲洗1min,随后转移到碳酸锂饱和溶液中，蓝化5min,蒸馏水中冲洗1min,随后转移到伊红溶液中，染色10min,蒸馏水中冲洗3min;

S9,组织脱水与透明：

取染色后的载玻片，依次浸泡在浓度梯度为70%、80%、90%、100%、100%的乙醇溶液中各脱水5min,随后转移到100%的二甲苯溶液一中透明3min,100%的二甲苯溶液二中透明2min;

S10,封片与观察：

将完成的载玻片置于切片盒上，滴加中性树脂盖上盖玻片进行封片，然后室温下进行干燥，显微镜下进行观察。

CN115597939A权