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《干细胞制剂质量控制和临床前研究指导原则(试行)》

1适用范围

本指导原则适用于按照药品研发路径申报、用于预防/治疗人类疾病的人源干细胞制剂，包括但不限于成体干细胞、诱导多能干细胞（iPSC）来源分化细胞、人胚胎干细胞（hESC）来源分化细胞、基因编辑修饰型干细胞制剂；不适用于未经体外操作的自体造血干细胞输注、成熟血细胞制剂、辅助生殖用配子/胚胎等已有明确临床应用规范的细胞类产品。对于类器官、干细胞衍生外泌体等衍生产品，可参照本指导原则核心要求结合专属技术标准开展研究。

2干细胞制剂质量控制

2.1生产用物料质量控制

2.1.1供者材料

（1）异体供者需符合《献血者健康检查要求》（GB18467）相关规定，额外开展人嗜T淋巴细胞病毒1/2型（HTLV-1/2）、巨细胞病毒（CMV）、EB病毒（EBV）核酸筛查，生殖系统来源供者需加测沙眼衣原体、淋球菌、弓形虫；采用血清学+核酸检测（NAT）联合筛查方案，NAT检测限≤50IU/ml，所有筛查指标均为阴性方可入组。

（2）自体供者可根据临床需求适当放宽筛查要求，但需留存完整供者病史记录、筛查原始数据，明确感染风险告知义务。

（3）所有供者材料需赋予唯一识别码，溯源信息覆盖供者基本信息、采集流程、运输存储条件、预处理记录，全流程记录保存期限≥30年。

2.1.2生产用试剂

（1）优先选用药用级、无异种成分、无血清试剂；确需使用含动物源成分试剂的，需排除疯牛病疫区来源，提供完整的外源因子筛查报告。

（2）胎牛血清（FBS）需符合《生物制品生产用胎牛血清质量控制要求》，完成牛腹泻病毒、牛细小病毒、牛免疫缺陷病毒专项筛查，最终制剂中FBS残留量≤50ng/ml；动物源胰酶等消化试剂最终残留量≤1μg/ml。

（3）使用饲养层细胞、基质胶等辅助培养材料的，需验证去除工艺有效性，最终制剂中饲养层细胞残留≤1个/10^6制剂细胞，基质胶残留≤10ng/ml；科研级试剂仅可在无合规商用级产品时选用，需提供完整的安全性评估报告、杂质去除验证数据。

2.1.3制剂辅料

（1）冻存保护剂核心成分二甲基亚砜（DMSO）需选用药用级，最终制剂中DMSO含量≤10%，优先控制在5%以内；人血白蛋白等辅助成分需符合《中国药典》三部相关要求，禁止使用动物源白蛋白。

（2）所有辅料需开展与细胞的相容性验证，确保细胞活率下降幅度≤10%、功能活性无显著降低。

2.2生产过程质量控制

（1）工艺验证需至少采用3批连续中试规模批次开展，关键工艺参数波动范围需经确认：培养温度波动≤±0.5℃、CO2浓度波动≤±0.5%、细胞接种密度波动≤±10%、消化时间波动≤±10%，所有批次工艺一致性符合率≥95%。

（2）需建立两级种子库体系（主细胞库、工作细胞库），种子库检定项目涵盖身份鉴定、活性检测、外源因子筛查、致瘤性检测、基因型一致性验证；种子库液氮存储稳定性需至少提供36个月验证数据，复苏后细胞活率≥80%、功能活性下降幅度≤10%。

（3）设置全流程过程检验节点：细胞分离后活率≥90%、传代培养后细胞纯度≥95%、收获前细胞活率≥85%，每代细胞均需开展无菌、支原体快速检测，结果阴性方可进入下一工序。

（4）工艺相关杂质去除需开展至少3批验证，验证覆盖率≥95%，所有杂质残留量符合终产品质量标准要求。

2.3终产品质量控制

2.3.1鉴别检验

（1）细胞身份鉴定：采用流式细胞术检测特征表面标志物，符合对应细胞类型的表达标准：如间充质干细胞（MSC）CD73+、CD90+、CD105+表达率≥95%，CD34-、CD45-、CD14-、CD19-、HLA-DR-表达率≤2%；神经干细胞巢蛋白（Nestin）、SOX2表达率≥90%；iPSC/hESC来源分化细胞需额外开展短串联重复序列（STR）鉴定，确认与种子库基因型一致性≥99%，无交叉污染。

（2）功能身份验证：iPSC/hESC需验证三胚层分化潜能，定向分化细胞需验证功能标志物表达：如心肌细胞cTnT、α-肌动蛋白表达率≥90%，具备自主搏动、正常电生理功能；胰岛β细胞胰岛素分泌量≥10μIU/10^3细胞/葡萄糖刺激2h。

2.3.2活性检验

（1）细胞活率≥80%，冻存制剂复苏后活率≥70%；2-8℃存储条件下48h内活率下降幅度≤10%，符合临床输注有效期要求。

（2）功能活性检测需针对适应症设计：如免疫调节用MSC对CD3/CD28刺激的T细胞增殖抑制率≥50%（效靶比1:10）；造血干细胞集落形成单位（CFU）形成率≥10%；软骨修复用MSCⅡ型胶原分泌量≥50ng/10^6细胞/24h。

2.3.3纯度与杂质检验

（1）目标细胞纯度≥90%，iPSC/hESC来源制剂中未分化多能细胞残留≤0.001%（即1个/10^5终产品细胞