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- 2026-05-12 发布于湖南
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柱色谱分离与薄层色谱类似,主要通过洗脱剂把分离的各组分逐个洗脱下来得的过程,也称为洗脱色谱。由于柱色谱中填充料的量远大于薄层色谱,因此柱色谱可用于分离比较大量(数克级)的物质。
分离原理是根据物质在固定相上的吸附能力不同而进行分离,一般情况下极性大的物质易被固定相吸附,极性小的物质不易被固定相吸附,柱层析过程即是吸附、解吸、再吸附和再解吸的过程。
实验室常用的柱色谱主要是吸附色谱,以硅胶或氧化铝为吸附剂。
色谱柱的选择
理论上是粗长的最好。柱子长了,相应的塔板数就高。柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。但采用粗长的柱子要消耗比较多的硅胶和溶剂。
柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分Rf值在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果杂质相差不到0.1,就要加大柱子,也可以减小淋洗剂的极性等。
装柱
实验室常用的装柱方法有两种:干法装柱和湿法装柱。
干法装柱
直接向玻璃柱子里加入硅胶,轻轻敲打色谱柱,使填装均匀,再加一层海沙,然后加入洗脱剂,使硅胶润湿。溶剂化后的硅胶应均匀、透明。
湿法装柱
将硅胶与一定量的洗脱剂调成悬浆状,倒入玻璃柱子内,打开活塞,
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