《现代农业生物技术》课件——8 9-植物基因的分离与克隆.pptxVIP

第四章园艺植物基因的分离与克隆Chapter4Cloning

主要内容:基因工程中常用的工具酶基因克隆载体基因的分离基因克隆策略及过程001002004003

第一节基因工程中常用的工具酶

第一节基因工程中常用的工具酶3影响试管苗玻璃化的因素工具酶功能限制性核酸内切酶识别特异序列，切割特定的DNA位点DNA连接酶催化DNA相邻的5’磷酸基和3’羟基末端之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接DNA聚合酶I①合成双链cDNA的第二条链；②缺口平移制作高比活探针；③DNA序列分析④填补3’末端反转录酶①合成cDNA；②替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5’羟基末端磷酸化，或标记探针末端转移酶在3’羟基末端进行同质多聚物加尾碱性磷酸酶切除末端磷酸基

一、限制性核酸内切酶RestrictionEndonuclease:endonuclease,aclassofendonucleaseenzymesthatidentifyspecificsequencesofDNAandcutdoublestrandsatoraroundtherecognitionsitestoformstickyorflatendsofDNA——概念