《现代农业生物技术》课件——电泳技术.pptxVIP

琼脂糖凝胶电泳技术

一、实验目的

了解电泳技术的原理和方法

掌握电泳技术的操作步骤和注意事项

独立完成电泳实验内容

二、实验材料与工具

样品材料：PCR产物

实验设备器具：电泳仪、电泳槽、烧杯、移液器、枪头、量筒、电泳分析仪等

实验试剂：琼脂糖、TAE电泳缓冲液、染色剂等

三、实验步骤

1.琼脂糖凝胶的配置

1）称取琼脂糖0.2g，倒入烧杯中

2）加入20ml配置好的TAE缓冲液，摇匀后放入微波炉中加热至沸腾（期间需要反复加热2-3次）；

3）放置10分钟左右（温度60度），加入染色剂1ul；

4）缓慢摇匀后，轻轻倒入制胶槽中，插好梳子，静止20分钟。

三、实验步骤

2.TAE缓冲液的配置

1）用量筒量取TAE母液（50X）20ml，加入980ml的蒸馏水。

2）充分混匀，备用。

3）戴手套操作。

三、实验步骤

3.电泳

1）取下梳子，将琼脂糖凝胶缓慢取出，放入电泳槽中；

2）加入适量的TAE缓冲液（需盖过凝胶）；红色电极朝下，黑色电极朝上；

3）用移液器取5ulDNA样品，加入1ul上样缓冲液；

3）用移液器加入样品到每个小空中，动作要轻缓，不能破坏凝胶，不可点到液体表面；

4）插入电极，红色对红色，黑色对黑色，打开电泳仪开关，调至电压至130V，等待25分钟（期间观察电泳条带移动情况），第一条指示带接近底边1/3时，关闭电泳仪。