用分光光度法测定利血平的含量.docVIP

【标题】用分光光度法测定利血平的含量 【作者】郑淮月 【关键词】利血平?维多利亚蓝B?显色反应?分光光度法 【指导老师】江 虹 【专业】环境科学 【正文】1. 引言利血平(reserpine，简写RSP)?别名?血安平，蛇根碱。一种吲哚型生物碱。分子式C33H40N2O9。存在于萝芙木属多种植物中，在催吐萝芙木中含量最高达1%。利血平兼有降血压作用及安定作用，能降低血压、减慢心率，对精神病性躁狂症状有安定之效[1]。一方面能使交感神经末梢囊泡内的神经递质（去甲肾上腺素）释放增加，另一方面阻止它再摄入囊泡；因此囊泡内的神经递质逐渐减少或耗竭，使交感神经冲动的传导受阻，因而表现出降压作用。其降压作用的特点为缓慢、温和而持久。服药后2～3日至1周，血压缓缓下降，数周后达到最低点。停药后血压在2～6周内回升。?对于轻度至中等度的早期高血压，疗效显著（精神紧张病例疗效尤好），长期应用小量，可将多数病人的血压稳定于正常范围内，但对严重和晚期病例，单用本品疗效较差，常与肼屈嗪、氢氯噻嗪等合用，以增加疗效。近年来的研究表明,利血平的药效与剂量密切相关,通过研究利血平对不同疾病的量效关系,找出其对不同疾病的最适剂量?,因此，对利血平进行分析研究，对临床上更好和更合理的使用利血平，具有极其深远的意义。利血平的测定常用的是电化学法[2]、化学发光法[3]、荧光光度法[4]、高效液相色普法[5]、毛细管电泳法[6]等。分光光度法由于操作简便、快速、仪器价廉、灵敏度较高的优点而得到广泛的应用。因此进一步研究灵敏度高、选择性好的新分光光度法有重要的意义。本研究利用易于普及的紫外-可见分光光度计，采用维多利亚蓝B可见分光光度法测定利血平的含量。研究中发现在pＨ7.2～9.0的条件下，利血平（RSP）与维多利亚蓝B反应生成蓝色物质，最大正吸收波长位于604nm，利血平在一定浓度范围内，遵从朗伯-比尔定律，由此建立了测定利血平的光度分析法，并探讨了适宜的反应条件和主要分析化学性质。该法用于市售药物中利血平含量及回收率的测定，结果满意。2.实验部分2.1 仪器和试剂? U-3010型紫外-可见分光光度计（日本株式会社日立高新技术?那珂事业所）；实验室pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。利血平(reserpine，简写RSP)标准溶液：标准溶液的浓度20?μg/mL，维多利亚蓝B（Victoria blue B，中国医药（集团）上海化学试剂公司）溶?液：1.0×10-3 mol/L。缓冲溶液：配制pH为2.35；2.82；3.31；3.64；4.23；4.60；5.22；5.60；6.36；6.81；7.21；7.39；7.63；7.79；8.05；8.21；8.40；8.60；8.80；8.96；9.32；9.51；10.07；10.59的Tris-HCl缓冲溶液。表面活性剂：OP（乳化剂）1%（w）；十二烷硫酸钠（SLS）1.0×10-3mol/L；溴化十六烷基三甲基铵（CTMAB）1.0×10-3mol/L；十二烷基硫酸钠（SDS）1.0×10-3mol/L；十二烷基苯磺酸钠（Triton）8g/L。利血平为生化试剂，其余试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。2.2实验方法于10mL比色管中，准确加入一定量的20μg/mL RSP标准溶液，再依次准确加入1.0mLpH=8.21的Tris-HCl缓冲溶液和1.0mL1.0×10-4mol/L维多利亚蓝B溶液，用水稀释至刻度，摇匀，10min后，以试剂空白为参比，在最大正吸收波长处以1cm液池测其吸光度。3.结果与讨论3.1吸收光谱按实验方法配制溶液后，于U-3010型紫外-可见-近红外分光光度计上扫描吸收光谱(图1表明)，利血平（RSP）在可见光区几乎无吸收（曲线1）维多利亚蓝B在可见光区产生强烈吸收，最大吸收波长为613nm（曲线2），当在利血平溶液中加入维多利亚蓝B时（pH=8.21），二者发生显色反应生成具有正、负吸收峰的蓝色物质（曲线3），最大正吸收波长为604nm，蓝移9nm。RSP在一定浓度范围与A呈良好的线性关系（图2）。3.2 反应条件的选择3.2.1显色剂用量的选择在10mL的比色管中加入1.0mL的RSP标准溶液和1.0mLpH=8.21的Tris-HCl，再分别加入V=0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL浓度为1.0×10-4mol/L维多利亚蓝B溶液。测定了不同用量的维多利亚蓝B溶液对体系灵敏度的影响。结果表明，浓度为1.0×10-3mol/L维多利亚蓝B溶液用量为1.0mL时比较适宜,实验选用1.0mL。如图33.2.2缓冲溶液用量及p