【毕业论文】氯霉素与曙红Y的显色反应及应用.docVIP

【标题】氯霉素与曙红Y的显色反应及应用 【作者】刘 哲 【关键词】氯霉素??曙红Y??分光光度法??显色反应 【指导老师】江 虹 【专业】化学 【正文】1??引言氯霉素（chloramphenicol）是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。氯霉素的化学名为：D-苏式-1-对硝基苯基-2-二氯乙酰氨基-1，3丙二醇，其化学结构含有对硝基苯基、丙二醇与二氯乙酰胺三个部分，分子中还含有氯。摩尔质量：323.13g/mol。其结构式为：?目前，测定氯霉素含量的方法有微生物检定法[1]、高效液相色谱法（HPLC）[2-4]、一阶导数光谱法[5-7]、快速碘量法[8]、单扫描示波极谱法[9]、比色法[10]、旋光法[11]、近红外光谱法[12]等。微生物检定法测定氯霉素的含量,比较繁琐,实验误差大,影响因素多,周期长,结果误差大,造成含量过于偏低，不太适合实验室操作使用。高效液相分析法结果准确，灵敏度高、重复性良好，方法简便可行。但此种方法不足之处是实验前期准备复杂，可重复性差，仪器昂贵。一阶导数光谱法测定氯霉素的含量方法准确、灵敏、重现性好，且操作简便、快速，易于普及，对测定的样品无需分离就可以直接测定样品中氯霉素的含量，同时还可以有效的消除其它组分的干扰。这种方法测定的范围是在200~400nm。快速碘量法测定氯霉素的含量操作简单，测定速度快。但是在利用这种方法测定时，溶液必须是自然冷却至室温再测定，所以这个测定温度很难控制好。单扫描示波极谱法可得到一个灵敏的氯霉素还原峰，有一个峰电位。峰电流与氯霉素浓度在一定范围内呈现一定的线性关系。而且该方法快速准确可靠，最低检出限可达10-8 mol/L?,但是这种方法在操作运用过程中的要求相当的高。比色法比较直观、快速，但氯霉素及其衍生物在溶剂中溶解度不大，且比色测定中所用显色试剂多数都能与氯霉素的分解产物作用，因而很有可能得出错误的结果。旋光法操作简便快速，适合药厂对本品中间体的质量控制。但是旋光度会随测定温度的变化而发生变化。近红外光谱法是一种新型快速定量分析方法，它具有处理简单、无污染、方便快捷、不破坏检材、可在线检测等优点。但是近红外光谱中有效信息率低。上述测定方法有的因仪器昂贵，使测定普及率不高；有的费时，步骤繁多及准确度不高等诸多原因，而紫外可见分光光度法具有普及率高、操作简便快捷，重现性好、结果准确、灵敏度较高等优点。因此本实验将采用曙红Y分光光度法来进行研究，建立用光度法测定氯霉素的新体系便于快速准确测定氯霉素的含量。在pH=2.0的条件下,氯霉素与曙红Y反应生成橘红色离子缔合物，最大显色波长位于485nm。探讨了适宜的反应条件，该法用于市售药物中氯霉素含量的测定，结果令人满意。2??实验部分2.1??仪器与试剂U-3010型紫外-可见分光光度计（日本株式会社日立高新技术?那珂事业所）；实验室pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；氯霉素（chloramphenicol）标准溶液：储备液浓度1.0×10-3mol/L，工作液浓度1.0×10-4mol/L；曙红Y：溶液浓度1.0×10-3mol/L；缓冲溶液：不同pH值的Tris-HCl溶液。标准品为生化试剂，其余试剂均为分析纯，试验用水为二次蒸馏水。2.2??实验方法准确移取1.0mL pH= 2.0的Tris-HCl缓冲溶液,再加入一定量的 1.0×10-4mol/L的氯霉素标准溶液和1.0mL 1.0×10-3mol/L的曙红Y溶液于10mL比色管中，用水稀释至刻度，摇匀，以试剂空白作参比，在最大吸收波长处以1.0cm液池测量吸光度。3??结果与讨论3.1??吸收光谱按实验方法配制溶液后，于U-3010型紫外-可见分光光度计上扫描吸收光谱。由图1可见，氯霉素在可见光区几乎无吸收（曲线1）；曙红Y在可见光区产生强烈吸收，最大吸收波长为518nm（曲线2），氯霉素与曙红Y反应后产生的络合物在可见光区有较强吸收，最大吸收波长为485nm（曲线3）。氯霉素在一定浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系（图2），可见，显色法可用于氯霉素含量的测定。 3.2??反应条件的选择3.2.1溶液酸度及用量的影响3.2.1.1试验了在不同pH值条件下，氯霉素与曙红Y形成缔合物的显色反应的影响。结果表明：这种离子缔合物受酸度的影响较大，该体系的pH适用范围为1.0~3.0，实验采用Tris-HCl缓冲溶液为pH=2.0。3.2.1.2确定了最佳Tris-HCl缓冲溶液的pH=2.0后,再取不同量的该缓冲溶液进行测定,结果表明用量为1.0mL时最佳，如果再增加,吸光度值反而下降。3.2.2显色