激活素A在高糖诱导的人肾小管上皮细胞的表达变化.docVIP

  激活素 A 在高糖诱导的人肾小管上皮细胞 的表达变化# 柳刚，任小军，关广聚* 5 10 15 20 25 （山东大学第二医院肾内科，济南 250033） 摘要：目的 通过高糖刺激的人近端肾小管上皮细胞株（HK-2），探讨激活素 A(ACT A)的 表达变化及卵泡抑素（FS）的干预作用。方法 HK-2 细胞生长于 DMEM 培养基。待细胞 生长至亚融合状态时，更换为无血清 DMEM 培养基使细胞生长同步化 24h，然后将细胞分 为 5 组：正常对照组（NG，5.5mmol/L 葡萄糖）、甘露醇对照组（MG，5.5mmol/L 葡萄糖 +25mmol/L 甘露醇）、高糖组（HG，25mmol/L 葡萄糖）、HG+FS100 组（25mmol/L 葡萄 糖+100ng/mlFS）、HG+FS500 组（25mmol/L 葡萄糖+500ng/mlFS）。12、24、48h 后收集 各组细胞及细胞上清液。Western blot 检测各组细胞 ACT??A 和 P-Smad2/3 的表达； ELISA 检测各组细胞上清液转化生长因子-?（TGF-?）和纤维连接蛋白（FN）的含量。结果 ACT??A 在 NG 组细胞微量表达，而 HG 组表达显著增加，呈时间依赖性。与 HG 组相比， FS 干预 组 ACT??A 表达显著减少，呈剂量依赖性。与 NG 组相比，P-Smad2/3 在 HG 组培养 24h 后 表达明显增加；FS 可抑制 P-Smad2/3 的高表达。ELISA 检测结果显示，与 NG 组相比，HG 组培养 12h 后 TGF-β表达即显著增加，呈时间依赖性，FS 干预对高糖诱导的 TGF-β高表 达没有影响。与 NG 组相比，HG 组培养 24h 后 FN 表达显著增高（P0.01），FS 对此有明 显抑制作用，呈剂量依赖性（P0.01）。结论高糖能刺激 HK-2 细胞 ACT A 表达增加，从 而促进肾小管上皮细胞 FN 的合成；FS 可通过阻断 ACT A 的活化，减轻肾小管上皮细胞 FN 的合成。 关键词：糖尿病肾病；激活素 A；卵泡抑素；Smad 蛋白；纤维连接蛋白 中图分类号：R587.1 The Expression of Activin A in high glucose-induced human kidney tubular epithelial cells LIU Gang, REN Xiaojun, GUAN Guangju (Department of Nephrology, the Second Hospital of Shandong University, JiNan 250033) Abstract: Objective To investigated the expression of activin A and the intervention effect of 30 35 40 45 follistatin by in vitro high glucose-cultured human proximal tubular epithelial cells (HK-2). Methods HK-2 cells, were maintained in Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM). When 80% confluent, the cells were incubated in a serum-free medium for 24 h and then exposed to the following experimental conditions for different time periods (12, 24 and 48 h): 5 mmol/L glucose (normal glucose group, NG), 5 mmol/L glucose plus 25 mmol/L mannitol (osmotic control, mannitol group, MG), 25 mmol/L glucose (high glucose group, HG), 25 mmol/L glucose plus 100 ng/mL rh-follistatin (100 ng/mL rh-follistatin intervention group, HG + FS100) or 25 mmol/L glucose plus 500 ng/mL rh-follistatin (500 ng/mL rh-follistatin intervention group, HG + FS500). Then, the