肺孢子虫体外培养的研究进展.pdfVIP

2·12 · 国外医学寄生虫病分册 2005 年 9 月第 32 卷第 5 期 Foreign Med Sci Parasit Dis , Sep. 2005 , Vol. 32 , No. 5 ·综述· 肺孢子虫体外培养的研究进展 1 2 姜雨 　安春丽 　　摘要 　肺孢子虫是引起肺孢子虫肺炎的病原体。20 世纪 80 年代以来 ,随着 AIDS 的蔓延 ,肺孢子 虫的感染率逐渐升高 ,因而引起了医学界的广泛关注。体外培养肺孢子虫至今仍是一个难题 ,为进一步 研究它的生活史、致病机制及药物筛选带来了困难。为了解肺孢子虫培养研究工作所取得的成果 ,现将 国内外在该方面的研究进展加以综述。 关键词 　肺孢子虫 ;培养 ;进展 ( ) 　　肺孢子虫 Pneumocystis 是一种机会性病原 为了缩短诱导时间 ,Lee 等用地塞米松对动物 ( 体 ,由它引起的肺孢子虫肺炎 Pneumocystis pneu 进行短暂的免疫抑制后 ,将已感染肺孢子虫大鼠的 monia) 是艾滋病最常见、最严重的合并症 ,病死率可 肺组织匀浆液通过气管灌入待感染大鼠肺中 , 约 高达 70 %～100 %[1 ] 。对肺孢子虫的病原学分类 , 4～6周 ,即可建立动物模型[3 ] 。 目前存在争议。鉴于抗原虫药对肺孢子虫有效而抗 此外 , Thullen 等报道用抗 CD4 + T 细胞抗体 真菌药无效 , 以往多数作者认为它属于原虫。近年 (OX38 和 W3/ 25 ) 建立了一种新的动物模型[4 ] 。 来分子生物学的研究表明 ,肺孢子虫线粒体的 16S 但此法诱导时间较长且感染率低 ,不适合用作培养 和 5S 核糖体 RNA 核苷酸序列与真菌的同源性更 研究。 近 ,并且肺孢子虫代谢过程中的 2 个关键酶 ———二 1. 2 　肺孢子虫的纯化方法 氢叶酸还原酶和胸腺嘧啶合成酶的结构也与真菌相 1. 2. 1 　滤过法 似 ,因此有人将其归为类真菌。对肺孢子虫的培养 将大鼠肺组织用不含镁和钙的无菌 PBS 液连 研究始于上世纪 50 年代。经过多年的艰辛努力 ,取 续漂洗以去除残余组织。将组织剪碎制成粗匀浆 , 得了一定的进展。现将前人的研究成果综述如下。 ( 用60 目不锈钢筛过滤, 离心 4 ℃ 1 000 rpm 15 min) ,弃上清。将沉淀重悬于 PBS 中 ,再次离心 ,将 1 　肺孢子虫的来源 沉淀作为接种物。 1. 1 　动物模型的建立 1. 2. 2 　Percoll 梯度离心法 用于培养研究的肺孢子虫主要来自动物模型。 将肺组织制成匀浆 , 把 Percoll 原液稀释为 已成功在猪、猫、兔、大鼠、小鼠等动物上建立了肺孢 1. 020 g/ ml 、1. 025 g/ ml 和 1. 035 g/ ml ,依次加入离 子虫模型。但综合考虑动物来源、成本及感染率等 ( 心管。将肺组织匀浆加在最上层。离心 4 ℃1 500 因素 ,大鼠为建立动物模型的首选。常用的大鼠为 rpm 15 min) 。在 1. 025 g