环境仪器分析高效液相色谱法.pptVIP

图示 续前 3）传质阻抗项及其影响 图示 高效液相色谱仪由以下五部分组成： 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 记录系统（记录仪、积分仪和色谱工作站） 第四节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪流程图 1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置 高效液相色谱仪的工作过程： 输液泵将流动相一稳定的流速或压力输送到分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品倒入，流动相将样品带入色谱柱，在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理或保存。 1．高压输液系统：溶剂储存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等。 泵：按输出液恒定的因素分 恒压泵：流量精度不稳 恒流泵：常用 对泵的要求： 无脉动 流速恒定 流量可调 耐腐蚀 便于实现程序控制 死体积小，便于测压、调整及维护。 2．进样装置 包括进样口、注射器和进样阀等，作用是把分析试样有效的送入色谱柱上进行分离。 1）隔膜进样---微量注射器 （高分子有机硅胶垫→进样室） GC系统压力较小，可以 HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期） 隔膜容易吸附样品产生记忆效应 2）阀进样：不必停泵，六通阀 3．色谱柱： 柱内径2~5mm,柱长10~30cm 装柱方法：干法和湿法两种 填料粒度大于20 μm的可用干法装柱；粒度小于 20 μm的填料不宜用干法装柱，这是由于微小颗粒表面存在着局部电荷，具有很高的表面能，因此在干燥时倾向于颗粒间的相互聚集，产生宽的颗粒范围并粘附于管壁，这些都不利于获得高的柱效。目前，对微颗粒填料的装柱只能采用湿法完成。 湿法也称匀浆法，即以一合适的溶剂或混合溶剂作为分散介质，使填料微粒在介质中高度分散，形成匀浆，然后，用加压介质在高压下将勾桨压入柱管中，以制成具有均匀、紧密填充床的高效柱。 柱再生：维护、保养、柱子的冲洗 4．检测器 1）紫外检测器 ultraviolet-visible detector, UVD 高效液相色谱仪中应用最广泛的一种。是一种灵敏度和检测精度都较高的选择性浓度型检测器。 适用于在紫外可见区有吸收的样品。 作用原理：基于被分析样品组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比耳(Beer)定律。 紫外可见检测器的优缺点 优点; (1)灵敏度高，最小检测浓度可达10-8 g·mL-1； (2) 选择性好，对柱温控制精度要求不高，对流动相流速变化不敏感，适用梯度洗脱，对样品无破坏性、线性范围宽。 缺点 (1)是对压力变化敏感，要求用无脉冲泵； (2) 对在紫外可见光区无强吸收的组分，需要经过衍生化，才可用紫外可见检测器，如糖类、氨基酸、类酯化物等； (3)不能用在紫外可见光区有吸收的溶剂作流动相。 2）示差折光检测器 refractive index detector, RID 浓度型通用检测器。 利用折光率的差别，根据流动相中出现组 分时，流动相折射率发生变化而设计的。 优点：对所有的物质都有响应 ； 灵敏度可达到10-7 g·mL-1 缺点： 对温度变化很敏感； 不能用于梯度洗提脱。 3）电化学检测器：electrochemical detector, ED 根据电化学分析方法设计的。 电化学检测器主要有两种类型： 一是根据溶液的导电性质，通过测定离子溶液电导率的大小来测量离子浓度； 另一类是根据化合物在电解池中工作电极上所发生的氧化-还原反应，通过电位、电流和电量的测量，确定化合物在溶液中的浓度。 电导检测器是根据被测组分被淋洗下来后，流动相电导率发生变化的原理而设计的。它仅适用于水溶性流动相中离子型化合物的检测，也是一种选择性检测器。 缺点是灵敏度不高，对温度敏感，需配以好的温控系统，且不适于梯度淋洗。 4）荧光检测器（F1uorescence Detector，FD） 基于物质经紫外光照射后，发射出较原激发光波长长的二次（荧）光。在一定条件下荧光的强度与溶液中产生荧光物质的浓度成正比。 荧光检测器为选择性检测器。 有两种类型