绿荧光蛋白的荧光强度在D2氨基酸氧化酶活性检测中的应用.pdfVIP

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2017-09-15 发布于重庆
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绿荧光蛋白的荧光强度在D2氨基酸氧化酶活性检测中的应用.pdf

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·95 · 　第 15 卷　第 2 期医学研究生学报 Vol. 15 　No. 2 　2002 年 4 月 Journal of Medical Post graduates Apr. 2002 ·论　　著· 绿荧光蛋白的荧光强度在 D氨基酸氧化酶活性检测中的应用 1 2 2 2 2 翟勇平 , 　王健民 , 　张雨生 , 　周　虹 , 　吕书晴 ( 1 南京军区南京总医院血液科 ,江苏南京 210002 ; 　2 第二军医大学长海医院血液科 ,上海 200433) ( ) ( ) 摘要 : 　目的:探讨在转基因细胞 K 和 K , 以内部核糖体进入位点 IRES 序列连接的绿荧光蛋白 GFP 的荧 Df Gc Df Gd ( ) 光强度为单位 ,衡量 D氨基酸氧化酶 DAAO 活性的准确性。　方法 : 白血病细胞系 K562e 经转染含 IRES 序列连接的 GFP 和 DAAO 基因的逆转录病毒载体 pLDf G ,获得稳定表达 GFP 和 DAAO 基因的单克隆细胞 K 和 K , Df Gc Df Gd ( ) + 以流式细胞仪和Lowry 测定其荧光阳性率以及平均荧光强度、蛋白量 ,用 D丙氨酸 DAla 作用 DAAO 细胞 ,并用 4 酚红氧化法测定培养上清 H O 。　结果 : K 和 K 细胞的荧光阳性率分别为 94. 64 %和 96. 31 % 。2 ×10 细胞 2 2 Df Gc Df